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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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woaiguozhen

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR产物连接不上载体啊 已有7人参与

虫友们，片段大小7000，想连入PCI载体，尝试分段连入不行，直接连也不行，操作肯定没问题，请问有没有什么好的方法啊？
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1楼 2016-03-21 14:56:16
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

丸子白菜

铜虫 (正式写手)
★
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1先用pfu，做平端连接入PCR-BLUNT载体，然后切出来，连入你要的载体。
2如果直接PCR之后就连，确认一下你的片段末端是啥样的
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5楼2016-03-22 04:49:40
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普通回帖

gaoboshi2015

捐助贵宾 (初入文坛)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先你要确定你的目的片段没问题。在确定你的目的片段没问题的情况下，要选择好的载体。比如这款TOPO无缝克隆载体：http://changyubio.com/product/277246233。
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2楼2016-03-21 20:23:57
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暮色西荷

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以试试先连接T载体

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3楼2016-03-21 20:51:14
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我爱chi辣椒

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 暮色西荷 at 2016-03-21 20:51:14
可以试试先连接T载体

7000连T载体可以吗？

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A right way maybe not a good way！
4楼2016-03-22 01:25:04
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以帮您做克隆

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6楼2016-03-22 07:54:57
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暮色西荷

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 我爱chi辣椒 at 2016-03-22 01:25:04
7000连T载体可以吗？
...

不知道，你可以看看说明书

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7楼2016-03-22 13:18:06
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我爱chi辣椒

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 暮色西荷 at 2016-03-22 13:18:06
不知道，你可以看看说明书
...

应该可以的，相对来说你的目的基因变成载体了，而原载体就是目的基因了！

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A right way maybe not a good way！
8楼2016-03-22 13:20:13
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woaiguozhen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 暮色西荷 at 2016-03-21 20:51:14
可以试试先连接T载体

T载体不能直接连这么大的片段吧
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9楼2016-03-22 13:47:51
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woaiguozhen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 丸子白菜 at 2016-03-22 04:49:40
1先用pfu，做平端连接入PCR-BLUNT载体，然后切出来，连入你要的载体。
2如果直接PCR之后就连，确认一下你的片段末端是啥样的

片段末端是带A碱基的
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10楼2016-03-22 13:49:27
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