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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物连接不上载体啊
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丸子白菜

铜虫 (正式写手)
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引用回帖:
10楼: Originally posted by woaiguozhen at 2016-03-22 13:49:27
片段末端是带A碱基的...

你扩增出来的那个东西，必须保证有连接端啊
如果是sticky end，扩增怎么扩啊，引物只能保证一条链有sticky
比如stickyend 是AAAAA T,你的扩增产物得是一条是AAAAA，另一条是T啊
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11楼2016-03-22 15:06:08
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指尖温暖

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以尽量降低载体的浓度，我是过夜摇一管5mL的载体，收菌1.5mL，提质粒洗脱时用50微升，在取30微升做50的酶切体系，洗脱用50微升，但是不要用割胶回收片段，直接用纯化试剂盒，（因为量少，跑胶看不到），正常连接体系，效率很高~
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12楼2016-03-23 14:32:18
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Jesselyn

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是扩增产物的是平端还是粘性末端的
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13楼2016-03-23 15:56:21
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