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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xxz紫桐

铜虫 (初入文坛)

[求助] 出现非目的条带的原因 已有4人参与

请教一下,出现非目的的条带主要是可能是什么原因?
对引物进行试验,结果是不可能出现条带的,可是还是出现了,是跟扩增程序有关系吗?
左边是用95℃  30s,58℃  30s,72℃  60s ,30个cycles扩增的,右边是95℃  30s,54℃  5min,72℃  60s ,5 cycles;95℃  30s,60℃  30s,72℃  60s,30个cycles。
左边不出现条带是正常的,可为什么右边拖带那么严重,是有非特异性条带出现吗?

出现非目的条带的原因
3.jpg
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xxz紫桐

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-18 11:14:29
我懂你的意思,我们平时设计引物都是选定特定的一段序列来设计的,即在设计是显示没有非特异性结合的。但是到我们实际来进行pcr的时候,我们用的模板往往不紧紧是引物设计时的那一段序列,还有两边延伸很长的,这样 ...

这几条引物,我是在NCBI上直接用序列比对的,确定说找不到基因组的序列才使用的,这样子也没办法保证引物的可行性吗?原本就是要设计不在该基因组的序列的,那这样子,要怎么确保重新设计的引物不会有什么问题呢?
8楼2016-03-18 16:33:48
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这个模板应该是大片段或者基因组吧,你是如何确定引物是不可能有非特异性条带呢,看你的图,感觉不仅仅 是pcr条件的问题,更可能是引物质量不行。

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-03-18 09:36:51
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xxz紫桐

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-18 09:36:51
你这个模板应该是大片段或者基因组吧,你是如何确定引物是不可能有非特异性条带呢,看你的图,感觉不仅仅 是pcr条件的问题,更可能是引物质量不行。

因为设计引物时是专门设计了在模板里面找不到的片段的,有在NCBI上面比对过的。
3楼2016-03-18 10:26:49
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王爱沫1

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

4楼2016-03-18 11:11:16
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