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xxz紫桐

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[求助] 出现非目的条带的原因已有4人参与

请教一下，出现非目的的条带主要是可能是什么原因？
对引物进行试验，结果是不可能出现条带的，可是还是出现了，是跟扩增程序有关系吗？
左边是用95℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 60s ，30个cycles扩增的，右边是95℃ 30s，54℃ 5min，72℃ 60s ，5 cycles；95℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 60s，30个cycles。
左边不出现条带是正常的，可为什么右边拖带那么严重，是有非特异性条带出现吗？

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1楼 2016-03-18 09:17:58

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xxz紫桐

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引用回帖:

5楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-18 11:14:29
我懂你的意思，我们平时设计引物都是选定特定的一段序列来设计的，即在设计是显示没有非特异性结合的。但是到我们实际来进行pcr的时候，我们用的模板往往不紧紧是引物设计时的那一段序列，还有两边延伸很长的，这样 ...

这几条引物，我是在NCBI上直接用序列比对的，确定说找不到基因组的序列才使用的，这样子也没办法保证引物的可行性吗？原本就是要设计不在该基因组的序列的，那这样子，要怎么确保重新设计的引物不会有什么问题呢？