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出现非目的条带的原因 已有4人参与
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请教一下，出现非目的的条带主要是可能是什么原因？ 对引物进行试验，结果是不可能出现条带的，可是还是出现了，是跟扩增程序有关系吗？ 左边是用95℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 60s ，30个cycles扩增的，右边是95℃ 30s，54℃ 5min，72℃ 60s ，5 cycles；95℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 60s，30个cycles。 左边不出现条带是正常的，可为什么右边拖带那么严重，是有非特异性条带出现吗？  3.jpg |
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3楼2016-03-18 10:26:49
原海亮
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【答案】应助回帖
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你这个模板应该是大片段或者基因组吧，你是如何确定引物是不可能有非特异性条带呢，看你的图，感觉不仅仅 是pcr条件的问题，更可能是引物质量不行。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-03-18 09:36:51
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本帖内容被屏蔽 |
4楼2016-03-18 11:11:16
原海亮
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我懂你的意思，我们平时设计引物都是选定特定的一段序列来设计的，即在设计是显示没有非特异性结合的。但是到我们实际来进行pcr的时候，我们用的模板往往不紧紧是引物设计时的那一段序列，还有两边延伸很长的，这样引物设计时的得分之类就不一定有参考价值了。特别是基因组设计引物时，由于软件和电脑限制，把整个基因组拿来设计引物不太现实。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-03-18 11:14:29
