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巢式PCR第二轮PCR总是出现非特异性条带，且目的条带不见？ 已有3人参与
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| 请教各位前辈，最近做巢式PCR，第一轮PCR效果非常好，第二轮PCR的时候用了5μl（3μl的也用过）第一轮PCR产物，在阳对、阴对（水）和样品中均出现了一条带，此带比目的条带小约十几bp（估计的），而目的条带没有发现（或有很暗很暗的一条），请教大家帮忙分析原因？ |
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2楼2015-11-10 13:59:58
3楼2015-11-10 14:41:57
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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不知该条带有没有测序确认，如没有可以测序看看；阴性对照有带污染无疑，建议将全部试剂换掉；根据一轮目的条带亮度确定稀释倍数，一般50-100倍 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-11-10 15:29:03
hanxiaominhu
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6楼2015-11-11 15:44:20