| 查看: 1718 | 回复: 3 | ||
2008011107金虫 (初入文坛)
|
[求助]
Southern杂交，目的样品没有条带。求帮忙解释原因。。。
|
|
最近几个月都在做Southern杂交，结果总是没有条带，或者条带出现的地方很诡异。我把我的实验操作过程简单说一下，希望各路神仙大侠能帮忙分析下原因。 我实验的目的主要是想知道目的基因在基因组中有多少个拷贝。用的是罗氏的试剂盒。 1.探针来自目的基因序列Pcr扩增后胶回收产物，点杂交后没有问题。 2.基因组用酶切后正常，处于弥散状。 3.碱变性后20xSSC转膜 4.120度30分钟固定 5.用试剂盒杂交液42度预杂交1h 6.42度杂交20h 7.低严谨和高严谨洗膜 9封闭2h 10.抗体孵育30min 11.洗膜2次，20min/次 12.检测液平衡10min 13.显色 结果：从右向左看：Marker（DM2000）居然有两条条带，目的样品是两种酶切产物都没有条带，阳性对照（是含有探针序列的质粒DNA）有条带。诡异的是，对照旁边我没加任何样品，却出现了非常整齐的条带，大小及位置和质粒样品上的条带一模一样。 求专家同行帮忙解释啊。。小女子在此谢过。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
大神救命！！！菌液PCR 出来酶切质粒没有目的条带
已经有5人回复
- 构建载体后，菌液PCR，没有目的条带！！！
已经有10人回复
- PCR背景太亮，怎么办
已经有9人回复
- 转化后菌液PCR鉴定，没有目的条带
已经有15人回复
- 【求助/交流】southern杂交后，条带没有特异性，出现涂抹带，请问大家是怎么回事啊？
已经有5人回复
2008011107
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 500.8
- 散金: 26
- 帖子: 33
- 在线: 54.9小时
- 虫号: 1163454
- 注册: 2010-12-06
- 性别: MM
- 专业: 水产养殖学
2楼2014-02-21 11:07:11
2008011107
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 500.8
- 散金: 26
- 帖子: 33
- 在线: 54.9小时
- 虫号: 1163454
- 注册: 2010-12-06
- 性别: MM
- 专业: 水产养殖学
3楼2014-02-23 18:55:03
4楼2014-09-10 21:42:08
