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2008011107金虫 (初入文坛)
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[求助]
Southern杂交，目的样品没有条带。求帮忙解释原因。。。
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最近几个月都在做Southern杂交，结果总是没有条带，或者条带出现的地方很诡异。我把我的实验操作过程简单说一下，希望各路神仙大侠能帮忙分析下原因。 我实验的目的主要是想知道目的基因在基因组中有多少个拷贝。用的是罗氏的试剂盒。 1.探针来自目的基因序列Pcr扩增后胶回收产物，点杂交后没有问题。 2.基因组用酶切后正常，处于弥散状。 3.碱变性后20xSSC转膜 4.120度30分钟固定 5.用试剂盒杂交液42度预杂交1h 6.42度杂交20h 7.低严谨和高严谨洗膜 9封闭2h 10.抗体孵育30min 11.洗膜2次，20min/次 12.检测液平衡10min 13.显色 结果：从右向左看：Marker（DM2000）居然有两条条带，目的样品是两种酶切产物都没有条带，阳性对照（是含有探针序列的质粒DNA）有条带。诡异的是，对照旁边我没加任何样品，却出现了非常整齐的条带，大小及位置和质粒样品上的条带一模一样。 求专家同行帮忙解释啊。。小女子在此谢过。。。 |
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