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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物电泳有拖尾，应该怎么改进
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foreverse7en

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR产物电泳有拖尾，应该怎么改进

DNA相同，6个引物，12个点样孔一个引物
植物叶片DNA

DNA50ng/ul 1ul
10*buffer 2ul
dNTP 10mmmol/L 0.25ul
Taq酶 5U/ul 0.2ul
引物 10mmol/L 1ul
20ul体系

94℃3min
94℃1min
55℃±6摄氏度（十二个温度）
72℃2min
35个循环
跑胶跑不好，能帮我分析一下应该怎么改进吗


2016.3.12.RJ3.引物7-12.30分钟.jpg

PCR产物电泳有拖尾，应该怎么改进
2016.3.11.LF3.引物7-12.jpg
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1楼 2016-03-14 17:18:16
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贾子阳009

铜虫 (小有名气)
★
foreverse7en(金币+1): 谢谢参与
PCR没跑过拖尾的

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4楼2016-03-14 17:57:17
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卡维斯

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
模板有部分降解。你可以把基因组取五微升跑电泳看看是否是有单一条带
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14楼2016-03-14 18:56:38
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蓝莓好吃吗87

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
模版或者引物的问题

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15楼2016-03-14 19:03:15
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hc123

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，我觉得只要有两个原因，一个是模版降解，二是引物非特异性，不是拖尾而是扩增非特异

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16楼2016-03-14 19:30:36
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
还是觉得换引物靠谱一点，要不你只能在程序上下功夫了。还有你的引物浓度写错了。
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17楼2016-03-15 09:23:21
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soareceo

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
18楼2016-03-15 09:51:48
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foreverse7en

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 18:56:38
模板有部分降解。你可以把基因组取五微升跑电泳看看是否是有单一条带

模板降解是DNA提取的时候没提好吗
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19楼2016-03-15 17:23:40
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卡维斯

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
19楼: Originally posted by foreverse7en at 2016-03-15 17:23:40
模板降解是DNA提取的时候没提好吗...

也可能是保存不当
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20楼2016-03-15 18:16:19
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会卖萌的滨榔

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个应该是你的温度低，或者DNA降解了，另外就是引物有问题了，建议调高温度试两个，如果还不行换一下引物看看，再不行就重新提DNA吧
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21楼2016-03-15 19:05:42
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foreverse7en

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 会卖萌的滨榔 at 2016-03-15 19:05:42
这个应该是你的温度低，或者DNA降解了，另外就是引物有问题了，建议调高温度试两个，如果还不行换一下引物看看，再不行就重新提DNA吧

DNA提的时候加了TE溶解之后直接放到-20℃吗，还是要放在4℃一点时间再放到-20摄氏度哦
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22楼2016-03-16 11:12:22
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盛伦友

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
22楼: Originally posted by foreverse7en at 2016-03-16 11:12:22
DNA提的时候加了TE溶解之后直接放到-20℃吗，还是要放在4℃一点时间再放到-20摄氏度哦...

直接放在负20度和先放在4度后放在负20度有影响吗，会有多大影响呢？

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23楼2017-06-01 17:14:57
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syhorchid2楼
2016-03-14 17:46   回复  
foreverse7en(金币+1): 谢谢参与
zhenwuhuang3楼
2016-03-14 17:54   回复  
foreverse7en(金币+1): 谢谢参与
baiyang3135楼
2016-03-14 18:00   回复  
foreverse7en(金币+1): 谢谢参与
Zhumy6楼
2016-03-14 18:02   回复  
foreverse7en(金币+1): 谢谢参与
yanyuxiaoxi7楼
2016-03-14 18:04   回复  
foreverse7en(金币+1): 谢谢参与
嗯 发自小木虫Android客户端
liubank8楼
2016-03-14 18:14   回复  
foreverse7en(金币+1): 谢谢参与
祝福
怕哦哦哦9楼
2016-03-14 18:20   回复  
foreverse7en(金币+1): 谢谢参与
yuanwangj10楼
2016-03-14 18:26   回复  
foreverse7en(金币+1): 谢谢参与
祝福
yanlangw11楼
2016-03-14 18:33   回复  
foreverse7en(金币+1): 谢谢参与
libeip12楼
2016-03-14 18:35   回复  
foreverse7en(金币+1): 谢谢参与
zhanshul13楼
2016-03-14 18:36   回复  
foreverse7en(金币+1): 谢谢参与
祝福
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