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汕头大学海洋科学接受调剂
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木虫 (正式写手)

[求助] Red重组敲除基因

Red重组敲除基因
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)

2楼2016-02-29 18:08:10
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i760912798

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-02-29 18:08:10
请问,遇到什么问题吗

pcr扩增重组片段后,同源臂突变了

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3楼2016-03-13 13:57:14
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)

引物的问题吗?用的什么酶呢

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4楼2016-03-13 14:00:38
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i760912798

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-03-13 14:00:38
引物的问题吗?用的什么酶呢

设计长引物普通taq酶扩的,引物大小80bp左右。

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5楼2016-03-13 14:07:53
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)

最好用高保真酶,普通酶的保真性不够

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6楼2016-03-13 15:56:03
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i760912798

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-03-13 15:56:03
最好用高保真酶,普通酶的保真性不够

你用Red重组系统敲除过基因吗?pcr产物不经测序验证可以直接用于电转化吗?

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7楼2016-03-13 16:15:09
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)

8楼2016-03-13 16:41:44
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i760912798

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-03-13 16:41:44
我做过,先测序再电转

我用普通taq酶扩增重组片段后连接T载体后测序,结果同源臂序列突变很多,你遇见过这种问题吗?

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9楼2016-03-13 17:22:52
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)

没有,所以你要用高保真酶啊,我们都是用高保真酶

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10楼2016-03-13 17:40:39
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