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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » Red重组敲除基因
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木虫 (正式写手)

[求助] Red重组敲除基因

Red重组敲除基因
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1楼 2016-02-29 17:45:58
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
请问，遇到什么问题吗

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2楼2016-02-29 18:08:10
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木虫 (正式写手)
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2楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-02-29 18:08:10
请问，遇到什么问题吗

pcr扩增重组片段后，同源臂突变了

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3楼2016-03-13 13:57:14
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
引物的问题吗？用的什么酶呢

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4楼2016-03-13 14:00:38
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木虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-03-13 14:00:38
引物的问题吗？用的什么酶呢

设计长引物普通taq酶扩的，引物大小80bp左右。

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5楼2016-03-13 14:07:53
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
最好用高保真酶，普通酶的保真性不够

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6楼2016-03-13 15:56:03
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木虫 (正式写手)
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6楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-03-13 15:56:03
最好用高保真酶，普通酶的保真性不够

你用Red重组系统敲除过基因吗？pcr产物不经测序验证可以直接用于电转化吗？

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7楼2016-03-13 16:15:09
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
我做过，先测序再电转

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8楼2016-03-13 16:41:44
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木虫 (正式写手)
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8楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-03-13 16:41:44
我做过，先测序再电转

我用普通taq酶扩增重组片段后连接T载体后测序，结果同源臂序列突变很多，你遇见过这种问题吗？

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9楼2016-03-13 17:22:52
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
没有，所以你要用高保真酶啊，我们都是用高保真酶

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10楼2016-03-13 17:40:39
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