应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » red同源重组做敲除时 电入片段后pcr无条带？？
31/1返回列表
查看: 826  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

淘七九懒

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] red同源重组做敲除时 电入片段后pcr无条带？？

如题，在大肠JM109中用red同源重组做敲除时，电入扩增好的片段，然后PCR验证是否敲除成功。照理说无论是否敲除成功，都该有条带的（若成功，该是1500bp;不成功，该是基因大小）。可我的PCR结果是阳性对照（肯定含该基因的菌）都有基因大小的条带，做了电击的都没有条带。。。然后我提基因组验证，有的敲除成功，可是抗性一直消不掉。
有以下问题：我的pcr是用95度10min预变性，95度30s变性。而且阳性对照都出了很好的条带，为甚么做了电击的菌做菌落pcr就没东西出来？而提了基因组又能有条带的？为啥后面消抗老不长？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

敲除验证

» 猜你喜欢
1楼 2015-08-31 16:49:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

logo521

铁虫 (小有名气)
师兄，我也要做基因敲除，能不能跟你交换一下做基因敲除的质粒呢。。。。。
赞一下 回复此楼
2楼2015-09-12 08:37:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

痞子无敌

金虫 (正式写手)
楼主好，我现在也遇到了这样的问题。就是做插入抗性进行基因敲除，现在菌落PCR验证出了问题，具体是这样：用kna双引物a,b进行菌落PCR，有目的条带；用目的基因前后双引物c,d（kan插入基因内部）进行菌落PCR，无任何条带。以上实验用的是同样的模板，同样的延伸时间，在同一台PCR仪中，也是同时做的。但是，没有预想中的结果。之前用c,d以基因组为模板，是有条带的，虽然特异性不太好，有杂带，但是菌落PCR时无任何结果，我没有想到原因。请问楼主后来问题解决了没有
赞一下 回复此楼
当你当你的眼睛眯着笑
3楼2016-05-21 11:44:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 淘七九懒 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 CyTWnZiM0cS6 2026-08-02 3/150 2026-08-02 20:43 by 3VGOm6paSgqv
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 5/250 2026-08-02 20:32 by 3VGOm6paSgqv
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 9/450 2026-08-02 20:32 by 3VGOm6paSgqv
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 5/250 2026-08-02 20:31 by 3VGOm6paSgqv
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 6/300 2026-08-02 20:21 by 3VGOm6paSgqv
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 11/550 2026-08-02 20:11 by 3VGOm6paSgqv
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 14/700 2026-08-02 20:11 by 3VGOm6paSgqv
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +11 archvillain 2026-08-02 13/650 2026-08-02 20:09 by symmetry
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 17/850 2026-08-02 20:03 by 3VGOm6paSgqv
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 10/500 2026-08-02 20:03 by 3VGOm6paSgqv
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 17/850 2026-08-02 19:58 by 3VGOm6paSgqv
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 17/850 2026-08-02 19:54 by 3VGOm6paSgqv
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 15/750 2026-08-02 19:54 by 3VGOm6paSgqv
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 21/1050 2026-08-02 19:52 by 3VGOm6paSgqv
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 20/1000 2026-08-02 18:04 by ca3DVAx4OB19
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +18 低垂的野花 2026-07-31 24/1200 2026-08-02 16:03 by swallowwh
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +15 布布和一二 2026-07-30 21/1050 2026-08-02 10:56 by iaeyuan
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 10/500 2026-08-02 10:00 by 锦衣卫寒战
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭