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利用Red重组系统进行乳酸菌基因敲除问题
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本人最近尝试利用Red重组系统进行乳酸乳球菌的基因敲除，尝试利用pKD46电转乳酸菌，但是涂板得不到正确菌株。问过一些前辈后推测可能是因为质粒上没有乳酸菌相关的复制子。可是有文献中说利用pKD46完成了乳酸菌的基因敲除，因此不敢确定。 而且现在手头上也没有别的质粒可用，因此想尝试在pKD46中加入一个乳酸菌中的复制子，使其变成穿梭质粒。请问如果这样做的话是不是可以像普通的酶切连接一样，将复制子片段克隆下来，连接在pKD46上即可？还是说有其他方面的要求？ 在这里想问一下有没有哪位前辈也在做这方面的工作，能不能指点一二？多谢多谢！！ |
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