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prthefu木虫 (著名写手)
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跑胶条带中，marker清晰但目的条带不够亮 已有4人参与
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把PCR产物进行电泳后，对1%Agarose和1.5%Agarose两个浓度下的条带图谱有小疑惑。 希望能有人帮忙解答： 下面电泳图谱中，左、右边分别为1%和1.5%Agarose的电泳图，其中1%的目的条带很亮，右边的Marker条带较为模糊；但是在1.5%Agarose的电泳图中，Marker条带清晰，目的条带却不如之前的亮，所以我现在不太确定，到底是选择哪个浓度做。 再说明一下，我后面对PCR产物进行连接转化，所以，我是选择目的条带亮的还是Marker条带清晰的呢？  1%和1.5%Agarose电泳图.jpg.JPG |
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-02-28 10:09:14
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胶浓度并不能给你后续实验造成实质性影响啊！1%或1.5%都可以进行胶回收，关键是你的目的产物要达到足够的量才能保证你胶回收或者PCR纯化之后得到足够浓度的目的产物以满足后续连接之需 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-02-26 00:39:22
xiangyingliu
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-28 10:09:31
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做连接必须要保证足够的浓度，建议你选择条带亮的那个，看你的左边几个条带都很特异而且很亮就拿他回收 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-02-26 09:52:33
11楼2016-02-28 10:05:20
原海亮
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首先高浓度的胶对于片段的分离效果较好，特别是小片段的分离，所以相对来讲你的高浓度的marker条带分离较好，同时高浓度胶对于染色效果也是有点影响的，所以整体条带亮度不高也正常；其次，目的条带的亮度问题，如果你是同一样品点了不同胶，那么不用考虑那么多，本身你胶的制备，胶的厚度，染色效果，上样量都会有误差，这个亮度差异没有什么指导意义，并且对你回收目的条带没有影响。最后，无论是做载体酶切回收还是pcr回收，都尽量获得高浓度的产物来进行，毕竟胶回收的过程会有一部分目的片段损失，祝好！ 发自小木虫Android客户端 |
12楼2016-02-28 10:32:38
原海亮
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【答案】应助回帖
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亮度和浓度是有一定的参考价值的（相同上样量），获得高浓度的目的条带进行连接，不一定就可以获得较高正确率的转化子，连接的关键在于片段的酶切处理是否完全，如果酶切没有问题，片段浓度较低的话，可以适当调整连接体系，比如20微升，目的是可以多加入一些低浓度的片段，这样基本上可以满足普通克隆转化的（建库转化建议尽量获得高质量片段），， 发自小木虫Android客户端 |
21楼2016-03-01 11:53:15
3楼2016-02-26 01:36:26
prthefu
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6楼2016-02-26 09:54:53
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8楼2016-02-26 16:13:43
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-28 10:09:48
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-28 10:09:48
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你可以做个对比实验，同样的产物同样的量点不同的胶，marker也点一样的，跑胶的程度也是一样的，要跑到一样的位置，不要像这样左边的跑的开一点，然后再对比下看看 发自小木虫Android客户端 |
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