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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 跑胶条带中，marker清晰但目的条带不够亮
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LQF134

新虫 (初入文坛)
就选目的条带亮的回收，回收效果好，另外PCR跑胶的话点5微升的样可能会好一些

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11楼2016-02-28 10:05:20
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原海亮

木虫 (著名写手)
首先高浓度的胶对于片段的分离效果较好，特别是小片段的分离，所以相对来讲你的高浓度的marker条带分离较好，同时高浓度胶对于染色效果也是有点影响的，所以整体条带亮度不高也正常；其次，目的条带的亮度问题，如果你是同一样品点了不同胶，那么不用考虑那么多，本身你胶的制备，胶的厚度，染色效果，上样量都会有误差，这个亮度差异没有什么指导意义，并且对你回收目的条带没有影响。最后，无论是做载体酶切回收还是pcr回收，都尽量获得高浓度的产物来进行，毕竟胶回收的过程会有一部分目的片段损失，祝好！

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
12楼2016-02-28 10:32:38
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匿名

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13楼2016-02-28 17:17:42
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yzq6098273

金虫 (小有名气)
都可以

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天外飞仙
14楼2016-02-28 22:02:46
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sloop112

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
15楼2016-02-29 09:00:17
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管昌红

新虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by sloop112 at 2016-02-29 09:00:17
每次柱子回收胶会有一定的折损，外加不严格的操作会导致得率更低，所以洗脱两次后浓度非常低...

谢了

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16楼2016-02-29 10:12:28
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mr.clutch at 2016-02-26 00:39:22
胶浓度并不能给你后续实验造成实质性影响啊！1%或1.5%都可以进行胶回收，关键是你的目的产物要达到足够的量才能保证你胶回收或者PCR纯化之后得到足够浓度的目的产物以满足后续连接之需
...

选用1%浓度做胶回收后，跑胶无杂带，说明纯化的还可以，但是在判断浓度时，就是看条带亮不亮吗？
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
17楼2016-03-01 08:12:59
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiangyingliu at 2016-02-26 09:52:33
做连接必须要保证足够的浓度，建议你选择条带亮的那个，看你的左边几个条带都很特异而且很亮就拿他回收

胶回收之前，跑胶是亮的条带，但是做完胶回收，再次跑胶时，发现纯化后的条带不是很亮，这说明是浓度不够大吗？
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
18楼2016-03-01 08:14:51
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fudan671 at 2016-02-26 09:54:53
marker明显没有跑开，建议增加时间，量加5微升

1%的中marker没有跑开，如果增加时间，对目的条带会有影响吗？
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
19楼2016-03-01 08:15:44
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-02-28 10:32:38
首先高浓度的胶对于片段的分离效果较好，特别是小片段的分离，所以相对来讲你的高浓度的marker条带分离较好，同时高浓度胶对于染色效果也是有点影响的，所以整体条带亮度不高也正常；其次，目的条带的亮度问题，如果 ...

做连接时需要高浓度的产物，但是，怎样获得高浓度呢？我昨晚胶回收后，再次跑胶检测时，发现纯度可以，但是不是特别亮，这就代表浓度不是很高吗？亮度和浓度是对应的吗？
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20楼2016-03-01 08:19:34
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