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LQF134

新虫 (初入文坛)

就选目的条带亮的回收,回收效果好,另外PCR跑胶的话点5微升的样可能会好一些

发自小木虫Android客户端
11楼2016-02-28 10:05:20
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原海亮

木虫 (著名写手)

首先高浓度的胶对于片段的分离效果较好,特别是小片段的分离,所以相对来讲你的高浓度的marker条带分离较好,同时高浓度胶对于染色效果也是有点影响的,所以整体条带亮度不高也正常;其次,目的条带的亮度问题,如果你是同一样品点了不同胶,那么不用考虑那么多,本身你胶的制备,胶的厚度,染色效果,上样量都会有误差,这个亮度差异没有什么指导意义,并且对你回收目的条带没有影响。最后,无论是做载体酶切回收还是pcr回收,都尽量获得高浓度的产物来进行,毕竟胶回收的过程会有一部分目的片段损失,祝好!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
12楼2016-02-28 10:32:38
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匿名

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13楼2016-02-28 17:17:42
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yzq6098273

金虫 (小有名气)

天外飞仙
14楼2016-02-28 22:02:46
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sloop112

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

15楼2016-02-29 09:00:17
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管昌红

新虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by sloop112 at 2016-02-29 09:00:17
每次柱子回收胶会有一定的折损,外加不严格的操作会导致得率更低,所以洗脱两次后浓度非常低...

谢了

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16楼2016-02-29 10:12:28
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prthefu

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mr.clutch at 2016-02-26 00:39:22
胶浓度并不能给你后续实验造成实质性影响啊!1%或1.5%都可以进行胶回收,关键是你的目的产物要达到足够的量才能保证你胶回收或者PCR纯化之后得到足够浓度的目的产物以满足后续连接之需
...

选用1%浓度做胶回收后,跑胶无杂带,说明纯化的还可以,但是在判断浓度时,就是看条带亮不亮吗?
nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
17楼2016-03-01 08:12:59
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prthefu

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xiangyingliu at 2016-02-26 09:52:33
做连接必须要保证足够的浓度,建议你选择条带亮的那个,看你的左边几个条带都很特异而且很亮就拿他回收

胶回收之前,跑胶是亮的条带,但是做完胶回收,再次跑胶时,发现纯化后的条带不是很亮,这说明是浓度不够大吗?
nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
18楼2016-03-01 08:14:51
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prthefu

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by fudan671 at 2016-02-26 09:54:53
marker明显没有跑开,建议增加时间,量加5微升

1%的中marker没有跑开,如果增加时间,对目的条带会有影响吗?
nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
19楼2016-03-01 08:15:44
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prthefu

木虫 (著名写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-02-28 10:32:38
首先高浓度的胶对于片段的分离效果较好,特别是小片段的分离,所以相对来讲你的高浓度的marker条带分离较好,同时高浓度胶对于染色效果也是有点影响的,所以整体条带亮度不高也正常;其次,目的条带的亮度问题,如果 ...

做连接时需要高浓度的产物,但是,怎样获得高浓度呢?我昨晚胶回收后,再次跑胶检测时,发现纯度可以,但是不是特别亮,这就代表浓度不是很高吗?亮度和浓度是对应的吗?
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20楼2016-03-01 08:19:34
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