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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 跑胶条带中，marker清晰但目的条带不够亮
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prthefu

木虫 (著名写手)

[求助] 跑胶条带中，marker清晰但目的条带不够亮 已有4人参与

把PCR产物进行电泳后，对1%Agarose和1.5%Agarose两个浓度下的条带图谱有小疑惑。
希望能有人帮忙解答：
    下面电泳图谱中，左、右边分别为1%和1.5%Agarose的电泳图，其中1%的目的条带很亮，右边的Marker条带较为模糊；但是在1.5%Agarose的电泳图中，Marker条带清晰，目的条带却不如之前的亮，所以我现在不太确定，到底是选择哪个浓度做。
    再说明一下，我后面对PCR产物进行连接转化，所以，我是选择目的条带亮的还是Marker条带清晰的呢？

跑胶条带中，marker清晰但目的条带不够亮
1%和1.5%Agarose电泳图.jpg.JPG
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
1楼 2016-02-25 20:42:55
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 18761615793 at 2016-02-26 13:53:17
关键是你的目的条带大小是多少啊？

图中亮色条带就是我的目的条带，到我现在想搞清楚，为什么两个农夫下，一个是目的条带更亮，一个是marker跑的更好

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2016-02-26 16:13:43
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mr.clutch

新虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-02-28 10:09:14
胶浓度并不能给你后续实验造成实质性影响啊！1%或1.5%都可以进行胶回收，关键是你的目的产物要达到足够的量才能保证你胶回收或者PCR纯化之后得到足够浓度的目的产物以满足后续连接之需

发自小木虫Android客户端
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2楼2016-02-26 00:39:22
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管昌红

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mr.clutch at 2016-02-26 00:39:22
胶浓度并不能给你后续实验造成实质性影响啊！1%或1.5%都可以进行胶回收，关键是你的目的产物要达到足够的量才能保证你胶回收或者PCR纯化之后得到足够浓度的目的产物以满足后续连接之需
...

我回收前很亮 回收后为啥不亮了呢！洗脱了两次

发自小木虫IOS客户端
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3楼2016-02-26 01:36:26
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mr.clutch at 2016-02-26 00:39:22
胶浓度并不能给你后续实验造成实质性影响啊！1%或1.5%都可以进行胶回收，关键是你的目的产物要达到足够的量才能保证你胶回收或者PCR纯化之后得到足够浓度的目的产物以满足后续连接之需
...

再重复做1%Agarose跑胶，发现同样的条件，目的条带跑出的比如之前的亮，如果做胶回收，是不是要求目的条带要足够亮，而且，我还想问，做胶用的是那种大孔胶，上样量应该是多少啊，还有，在切胶时，都需要注意上么啊
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
4楼2016-02-26 09:19:46
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