24小时热门版块排行榜    

查看: 1490  |  回复: 8

易农植保

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达问题 已有4人参与

大神们好,最近做毕赤酵母表达,用的是KM71H和pPICZαA这套体系,构建完成并转化涂板后,培养挑选的克隆,根据煮冻煮等方法,用AOX引物对都只能扩增出自己的目的条带,比如我的目的条带是400bp,加上aox自身多余的部分,扩增出来的都是1000bp左右,说明书上貌似说还能扩出一个3.6k的条带,求教这是咋回事啊。1、我挑了20个克隆都没p出那个3.6k的片段。2、另外,做表达前都需要同时诱导表达好多克隆进行筛选一轮么?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原海亮

木虫 (著名写手)

天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-01-16 18:20:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

易农植保

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-01-16 18:20:46
最好拿个空载质粒作对照

空质粒做了对照  也P不出来
3楼2016-01-17 12:37:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

632362481

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
易农植保: 金币+5, ★★★很有帮助, 主要是克隆太多了,全部都提取基因组的话太麻烦了,要不我挑几个试试吧,多谢了 2016-01-18 16:27:59
买个OMEGA的酵母基因组提取试剂盒来提取总DNA。我就是那样做的。
。。。
4楼2016-01-18 11:04:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

boysil

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是你扩增体系不对?
5楼2016-01-18 12:00:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

易农植保

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by boysil at 2016-01-18 12:00:06
是不是你扩增体系不对?

扩增体系还有影响??
6楼2016-01-18 16:28:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaoyanjiu

新虫 (小有名气)

楼主解决与否,我也是扩不出来3.6Kbp条带。
7楼2017-03-07 10:54:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by kaoyanjiu at 2017-03-07 10:54:12
楼主解决与否,我也是扩不出来3.6Kbp条带。

3.6Kb的基因,如果模板GC含量不高的话很好P出来的
···
8楼2017-03-07 15:15:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

想批出3.6Kb的那条带,PCR条件要求的比较高,最重要的一个是延伸时间,目前最快的酶,你也需要大约180秒。
9楼2017-03-08 09:39:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 易农植保 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +7 vv迷 2026-03-22 7/350 2026-03-23 23:44 by Txy@872106
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 0703化学求调剂 +4 奶油草莓. 2026-03-22 5/250 2026-03-23 19:37 by pswait
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 3/150 2026-03-23 10:32 by Iveryant
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 315分,诚求调剂,材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300(化学)304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂,总分315(英一) +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 【同济软件】软件(085405)考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
信息提示
请填处理意见