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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 毕赤酵母表达问题
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易农植保

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达问题 已有4人参与

大神们好，最近做毕赤酵母表达，用的是KM71H和pPICZαA这套体系，构建完成并转化涂板后，培养挑选的克隆，根据煮冻煮等方法，用AOX引物对都只能扩增出自己的目的条带，比如我的目的条带是400bp，加上aox自身多余的部分，扩增出来的都是1000bp左右，说明书上貌似说还能扩出一个3.6k的条带，求教这是咋回事啊。1、我挑了20个克隆都没p出那个3.6k的片段。2、另外，做表达前都需要同时诱导表达好多克隆进行筛选一轮么？
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1楼 2016-01-16 17:57:17
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原海亮

木虫 (著名写手)
最好拿个空载质粒作对照

发自小木虫Android客户端
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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-01-16 18:20:46
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易农植保

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-01-16 18:20:46
最好拿个空载质粒作对照

空质粒做了对照  也P不出来
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3楼2016-01-17 12:37:30
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632362481

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
易农植保: 金币+5, ★★★很有帮助, 主要是克隆太多了，全部都提取基因组的话太麻烦了，要不我挑几个试试吧，多谢了 2016-01-18 16:27:59
买个OMEGA的酵母基因组提取试剂盒来提取总DNA。我就是那样做的。
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。。。
4楼2016-01-18 11:04:21
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boysil

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是你扩增体系不对？
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5楼2016-01-18 12:00:06
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易农植保

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by boysil at 2016-01-18 12:00:06
是不是你扩增体系不对？

扩增体系还有影响？？
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6楼2016-01-18 16:28:14
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)
楼主解决与否，我也是扩不出来3.6Kbp条带。
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7楼2017-03-07 10:54:12
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by kaoyanjiu at 2017-03-07 10:54:12
楼主解决与否，我也是扩不出来3.6Kbp条带。

3.6Kb的基因，如果模板GC含量不高的话很好P出来的
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···
8楼2017-03-07 15:15:13
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

想批出3.6Kb的那条带，PCR条件要求的比较高，最重要的一个是延伸时间，目前最快的酶，你也需要大约180秒。
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9楼2017-03-08 09:39:29
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