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yuguiyan至尊木虫 (文坛精英)
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RACE-PCR已知序列的扩增 已有2人参与
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想做RACE-PCR，首先我想扩增已知序列，那么我设计引物是加酶切位点需要考虑什么呢？ 普通PCR是根据想要连接的表达载体上的酶切位点来确定引物的酶切位点，这种RACE的怎么弄？跪求！！！  |
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【答案】应助回帖
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拜托下次问问题讲清楚一点，我先不管你所讲的普通PCR，race到底怎么回事，我来告诉你怎么做吧，race是要扩增未知的序列，但此未知序列的一端相邻的序列知道一部分，就拿这部分已知序列设计一段引物，与race引物一起进行扩增，扩增出的序列或者连载体（当然T载体最方便）去测序或者不连载体直接测序（需提供引物给测序公司，但race引物量应该不够，也太浪费，不建议此法），测序后就知道扩增出的片段序列了，然后根据测出的序列设计引物进行后续实验，根据序列内部酶切位点和后续工作中用到的载体上的酶切位点（做后续工作中可能把片段要从一个载体切下来连到另一载体上，如果这样，要考虑所有要用到载体上的合适位点）确定要用到酶切位点，把酶切位点加到所设计引物上，再加上保护碱基，合成引物进行PCR得到此前未知目的片段。 |
24楼2016-01-06 09:25:11
曼陀罗的祈祷
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6楼2016-01-03 00:14:54
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