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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RACE-PCR已知序列的扩增
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] RACE-PCR已知序列的扩增 已有2人参与

想做RACE-PCR，首先我想扩增已知序列，那么我设计引物是加酶切位点需要考虑什么呢？
普通PCR是根据想要连接的表达载体上的酶切位点来确定引物的酶切位点，这种RACE的怎么弄？跪求！！！
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1楼 2016-01-02 17:24:32
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
17楼: Originally posted by yguang at 2016-01-04 01:57:03
做race就是为了得到序列测序，测序完拿测出的序列去设计后面的实验，测序载体只是为了方便用通用引物测序，跟你后续实验无关，你可以连在任意载体去测序，也可以直接拿race出的产物去测序

"测序完拿测出的序列去设计后面的实验"
请问后面的实验中，我用到这段序列时，用的是含有序列的质粒吗？
这个质粒是与测序载体连在一起还是需要把测序载体切掉？
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18楼2016-01-04 09:13:32
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
race为什么要加酶切位点？先race出来产物进行测序，用测出的精确序列再设计引物加酶切位点进行后续工作，否则序列里是否有你加的酶切位点都不知道做，往下可能会出很多问题
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6楼2016-01-03 00:14:54
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yguang at 2016-01-03 00:14:54
race为什么要加酶切位点？先race出来产物进行测序，用测出的精确序列再设计引物加酶切位点进行后续工作，否则序列里是否有你加的酶切位点都不知道做，往下可能会出很多问题

我先利用普通PCR将已知的一段序列扩增出来，此时我想测序，连接T载体，那么测完序，想要做RACE时，需要把T载体切下来吗？
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7楼2016-01-03 11:15:28
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匿名

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8楼2016-01-03 11:32:19
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