应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RACE-PCR已知序列的扩增
313/4返回列表上一页1234下一页
查看: 1837  |  回复: 30
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
16楼: Originally posted by junior850621 at 2016-01-04 00:11:17
测序完了为什么还要切T载体？

我首先扩增这段已知序列，设计引物时需不需要加酶切位点呢？
赞一下 回复此楼
21楼2016-01-04 09:19:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
亲，你还没搞明白，是你先做RACE得到全部的序列，加酶切位点的话是需要专门设计引物的，而这两个是没有关联的，RACE引物和酶切位点的引物不一样，扩出来的产物也不一样，之后的用途也不一样，完全是两个方向
赞一下(2人) 回复此楼
想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
22楼2016-01-05 09:48:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2016-01-05 09:48:40
亲，你还没搞明白，是你先做RACE得到全部的序列，加酶切位点的话是需要专门设计引物的，而这两个是没有关联的，RACE引物和酶切位点的引物不一样，扩出来的产物也不一样，之后的用途也不一样，完全是两个方向

我说的是扩增已知的那段序列，需要加酶切位点吗？
赞一下 回复此楼
23楼2016-01-05 23:05:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
18楼: Originally posted by yuguiyan at 2016-01-04 09:13:32
"测序完拿测出的序列去设计后面的实验"
请问后面的实验中，我用到这段序列时，用的是含有序列的质粒吗？
这个质粒是与测序载体连在一起还是需要把测序载体切掉？...

拜托下次问问题讲清楚一点，我先不管你所讲的普通PCR，race到底怎么回事，我来告诉你怎么做吧，race是要扩增未知的序列，但此未知序列的一端相邻的序列知道一部分，就拿这部分已知序列设计一段引物，与race引物一起进行扩增，扩增出的序列或者连载体（当然T载体最方便）去测序或者不连载体直接测序（需提供引物给测序公司，但race引物量应该不够，也太浪费，不建议此法），测序后就知道扩增出的片段序列了，然后根据测出的序列设计引物进行后续实验，根据序列内部酶切位点和后续工作中用到的载体上的酶切位点（做后续工作中可能把片段要从一个载体切下来连到另一载体上，如果这样，要考虑所有要用到载体上的合适位点）确定要用到酶切位点，把酶切位点加到所设计引物上，再加上保护碱基，合成引物进行PCR得到此前未知目的片段。
赞一下(3人) 回复此楼
24楼2016-01-06 09:25:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)
引用回帖:
23楼: Originally posted by yuguiyan at 2016-01-05 23:05:01
我说的是扩增已知的那段序列，需要加酶切位点吗？...

你既然要对已知序列扩增，为什么要加酶切位点呢？
加酶切位点就是为了之后用酶把那段基因切下来才需要加，你既然不需要做这个，为什么要加酶切位点呢？也没用啊
赞一下 回复此楼
想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
25楼2016-01-06 11:33:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
24楼: Originally posted by yguang at 2016-01-06 09:25:11
拜托下次问问题讲清楚一点，我先不管你所讲的普通PCR，race到底怎么回事，我来告诉你怎么做吧，race是要扩增未知的序列，但此未知序列的一端相邻的序列知道一部分，就拿这部分已知序列设计一段引物，与race引物一起 ...

解释的很清楚，感觉楼主把RACE和后面载体构建搞混了
赞一下 回复此楼
想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
26楼2016-01-06 11:35:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
24楼: Originally posted by yguang at 2016-01-06 09:25:11
拜托下次问问题讲清楚一点，我先不管你所讲的普通PCR，race到底怎么回事，我来告诉你怎么做吧，race是要扩增未知的序列，但此未知序列的一端相邻的序列知道一部分，就拿这部分已知序列设计一段引物，与race引物一起 ...

已知序列扩增时，无需加酶切位点，对吗？
赞一下 回复此楼
27楼2016-01-08 15:27:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
28楼2016-01-12 11:04:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
29楼2016-01-15 23:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
30楼2016-01-16 13:23:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuguiyan 的主题更新
313/4返回列表上一页1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:47 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:27 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +9 且听虎啸 2026-08-07 12/600 2026-08-07 21:53 by 理想三旬2025
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭