24小时热门版块排行榜    

查看: 2341  |  回复: 15

wuxchao

木虫 (小有名气)

[交流] 关于重组载体鉴定

各位分子虫友,最近在做一个干扰载体构建,当目的片段连接后通过PCR测序结果显示条带大小无差(设置了原始载体的对照)但送去测序结果测不出来,请问是什么原因呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看沉思录

铁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wuxchao: 金币+1 2015-12-31 09:13:18
wuxchao: 金币+2 2016-04-05 14:57:26
(通过PCR测序结果显示条带大小无差异)这句话我可以理解为菌落PCR结果阳性或者是质粒双酶切结果条带是预计是一致的?
分析:
1.菌落PCR结果不一定准确,送测序你是送其中的一个还是几个?建议考虑多送几个测序。
2.酶切换酶双酶切作进一步确定。其他结果也无误时送两个测序。
3.测序结果测不出来是具体是什么意思?测序公司说无结果?让他们给你可能的原因。
QQ 2644862520承接整体课题服务,包括课题设计、实验实施、论文服务
2楼2015-12-31 08:45:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuxchao

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 看沉思录 at 2015-12-31 08:45:59
(通过PCR测序结果显示条带大小无差异)这句话我可以理解为菌落PCR结果阳性或者是质粒双酶切结果条带是预计是一致的?
分析:
1.菌落PCR结果不一定准确,送测序你是送其中的一个还是几个?建议考虑多送几个测序。 ...

PCR结果为菌落PCR的结果,测序了八个样,模板正常,均是无信号。
3楼2015-12-31 09:09:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看沉思录

铁虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
酶切验证下,弄一组连接用的两个酶切位点;弄一组其他的位点,酶切结果看下是怎么样的
QQ 2644862520承接整体课题服务,包括课题设计、实验实施、论文服务
4楼2015-12-31 10:58:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuxinyueer

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wuxchao: 金币+1 2015-12-31 15:30:12
一般做了菌落PCR后,若有目的条带,还要提质粒做酶切,最后才测序。若送去测序给质粒浓度太低,可能测不出来。
欢迎讨论,小木虫未能及时回复,请邮箱: lmzhang1994@gmail.com
5楼2015-12-31 13:09:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuxchao

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by liuxinyueer at 2015-12-31 13:09:30
一般做了菌落PCR后,若有目的条带,还要提质粒做酶切,最后才测序。若送去测序给质粒浓度太低,可能测不出来。

质粒都抽提了,也做了鉴定,今天也问了测序,那边也说不出什么所以然来!引物是自己根据载体序列设计的!

发自小木虫Android客户端
6楼2015-12-31 13:52:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

siriusxuan

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wuxchao: 金币+1 2015-12-31 15:30:23
wuxchao: 金币+1 2016-04-05 14:57:54
干扰载体一般指的是shRNA表达载体吧,由于反向互补序列的存在,测序时候用U6或者离目标序列太近都会造成序列中断或者无信号现象,我最近测得就是这样,只能看到前面十几个碱基。
公司推荐以后再来测,备注上 困难模板,他们会采用特殊方案进行测序。
此座可言轻社稷,江山万里起风尘。
7楼2015-12-31 15:02:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuxchao

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-12-31 15:02:53
干扰载体一般指的是shRNA表达载体吧,由于反向互补序列的存在,测序时候用U6或者离目标序列太近都会造成序列中断或者无信号现象,我最近测得就是这样,只能看到前面十几个碱基。
公司推荐以后再来测,备注上 困难模 ...

是的,我用的是PTCK303,在插入第一个片段后测序始终无信号

发自小木虫Android客户端
8楼2015-12-31 15:14:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

siriusxuan

木虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by wuxchao at 2015-12-31 15:14:50
是的,我用的是PTCK303,在插入第一个片段后测序始终无信号
...

送GENWIZ去试试,他们有这种特殊解决方案。
别的地方,我在生工也测出来过。
此座可言轻社稷,江山万里起风尘。
9楼2015-12-31 15:24:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oh0987

铁杆木虫 (职业作家)

555555555555
密码密码红
10楼2015-12-31 15:25:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wuxchao 的主题更新
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[职场人生] 40+中年人失业后,还能找到好工作吗? +11 xqy2009 2026-10-13 13/650 2026-10-15 21:32 by bear2007
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗? 200+7 David1982 2026-10-13 11/550 2026-10-15 10:30 by zyqchem
[硕博家园] 极限拉扯,如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了,离AI做有机合成还有多远? +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +4 好运来~9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
信息提示
请填处理意见