应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于重组载体鉴定
161/2返回列表12下一页
查看: 2251  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wuxchao

木虫 (小有名气)

[交流] 关于重组载体鉴定

各位分子虫友，最近在做一个干扰载体构建，当目的片段连接后通过PCR测序结果显示条带大小无差（设置了原始载体的对照）但送去测序结果测不出来，请问是什么原因呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-12-31 08:39:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看沉思录

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wuxchao: 金币+1 2015-12-31 09:13:18
wuxchao: 金币+2 2016-04-05 14:57:26
（通过PCR测序结果显示条带大小无差异）这句话我可以理解为菌落PCR结果阳性或者是质粒双酶切结果条带是预计是一致的？
分析：
1.菌落PCR结果不一定准确，送测序你是送其中的一个还是几个？建议考虑多送几个测序。
2.酶切换酶双酶切作进一步确定。其他结果也无误时送两个测序。
3.测序结果测不出来是具体是什么意思？测序公司说无结果？让他们给你可能的原因。
赞一下 回复此楼
QQ 2644862520承接整体课题服务，包括课题设计、实验实施、论文服务
2楼2015-12-31 08:45:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuxchao

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 看沉思录 at 2015-12-31 08:45:59
（通过PCR测序结果显示条带大小无差异）这句话我可以理解为菌落PCR结果阳性或者是质粒双酶切结果条带是预计是一致的？
分析：
1.菌落PCR结果不一定准确，送测序你是送其中的一个还是几个？建议考虑多送几个测序。 ...

PCR结果为菌落PCR的结果，测序了八个样，模板正常，均是无信号。
赞一下 回复此楼
3楼2015-12-31 09:09:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看沉思录

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
酶切验证下，弄一组连接用的两个酶切位点；弄一组其他的位点，酶切结果看下是怎么样的
赞一下 回复此楼
QQ 2644862520承接整体课题服务，包括课题设计、实验实施、论文服务
4楼2015-12-31 10:58:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuxinyueer

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wuxchao: 金币+1 2015-12-31 15:30:12
一般做了菌落PCR后，若有目的条带，还要提质粒做酶切，最后才测序。若送去测序给质粒浓度太低，可能测不出来。
赞一下 回复此楼
欢迎讨论，小木虫未能及时回复，请邮箱: lmzhang1994@gmail.com
5楼2015-12-31 13:09:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuxchao

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liuxinyueer at 2015-12-31 13:09:30
一般做了菌落PCR后，若有目的条带，还要提质粒做酶切，最后才测序。若送去测序给质粒浓度太低，可能测不出来。

质粒都抽提了，也做了鉴定，今天也问了测序，那边也说不出什么所以然来！引物是自己根据载体序列设计的！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2015-12-31 13:52:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

siriusxuan

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wuxchao: 金币+1 2015-12-31 15:30:23
wuxchao: 金币+1 2016-04-05 14:57:54
干扰载体一般指的是shRNA表达载体吧，由于反向互补序列的存在，测序时候用U6或者离目标序列太近都会造成序列中断或者无信号现象，我最近测得就是这样，只能看到前面十几个碱基。
公司推荐以后再来测，备注上 困难模板，他们会采用特殊方案进行测序。
赞一下 回复此楼
此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
7楼2015-12-31 15:02:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuxchao

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-12-31 15:02:53
干扰载体一般指的是shRNA表达载体吧，由于反向互补序列的存在，测序时候用U6或者离目标序列太近都会造成序列中断或者无信号现象，我最近测得就是这样，只能看到前面十几个碱基。
公司推荐以后再来测，备注上 困难模 ...

是的，我用的是PTCK303，在插入第一个片段后测序始终无信号

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2015-12-31 15:14:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

siriusxuan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by wuxchao at 2015-12-31 15:14:50
是的，我用的是PTCK303，在插入第一个片段后测序始终无信号
...

送GENWIZ去试试，他们有这种特殊解决方案。
别的地方，我在生工也测出来过。
赞一下 回复此楼
此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
9楼2015-12-31 15:24:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oh0987

铁杆木虫 (职业作家)
555555555555
回复此楼
密码密码红
10楼2015-12-31 15:25:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wuxchao 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +4 瞬息宇宙 2026-08-10 4/200 2026-08-11 02:02 by 旁观2020
[基金申请] 帮忙看看fileCode +4 wwncly 2026-08-10 8/400 2026-08-10 22:07 by demonstreets
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +3 Tide man 2026-08-10 3/150 2026-08-10 21:48 by GZUZM
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 15/750 2026-08-10 19:29 by 要乐观耀哥
[基金申请] filecode +8 documentary 2026-08-10 8/400 2026-08-10 19:20 by loufangrui
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭