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wuxchao

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[交流] 关于重组载体鉴定

各位分子虫友，最近在做一个干扰载体构建，当目的片段连接后通过PCR测序结果显示条带大小无差（设置了原始载体的对照）但送去测序结果测不出来，请问是什么原因呢？

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1楼 2015-12-31 08:39:52

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wuxchao

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5楼: Originally posted by liuxinyueer at 2015-12-31 13:09:30
一般做了菌落PCR后，若有目的条带，还要提质粒做酶切，最后才测序。若送去测序给质粒浓度太低，可能测不出来。

质粒都抽提了，也做了鉴定，今天也问了测序，那边也说不出什么所以然来！引物是自己根据载体序列设计的！

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6楼2015-12-31 13:52:00

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wuxchao: 金币+1 2015-12-31 09:13:18
wuxchao: 金币+2 2016-04-05 14:57:26

（通过PCR测序结果显示条带大小无差异）这句话我可以理解为菌落PCR结果阳性或者是质粒双酶切结果条带是预计是一致的？
分析：
1.菌落PCR结果不一定准确，送测序你是送其中的一个还是几个？建议考虑多送几个测序。
2.酶切换酶双酶切作进一步确定。其他结果也无误时送两个测序。
3.测序结果测不出来是具体是什么意思？测序公司说无结果？让他们给你可能的原因。

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2楼2015-12-31 08:45:59

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 看沉思录 at 2015-12-31 08:45:59
（通过PCR测序结果显示条带大小无差异）这句话我可以理解为菌落PCR结果阳性或者是质粒双酶切结果条带是预计是一致的？
分析：
1.菌落PCR结果不一定准确，送测序你是送其中的一个还是几个？建议考虑多送几个测序。 ...

PCR结果为菌落PCR的结果，测序了八个样，模板正常，均是无信号。

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3楼2015-12-31 09:09:40

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看沉思录

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酶切验证下，弄一组连接用的两个酶切位点；弄一组其他的位点，酶切结果看下是怎么样的

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4楼2015-12-31 10:58:27

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