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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】关于重组载体鉴定 已有3人参与

现在在做重组载体构建,从酶切结果看,已经构建成功,现在不知道是否需要测序鉴定(片段较长,不知道值不值的测序)?
或者做PCR鉴定?


请虫友们帮忙
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pan琳lin

木虫 (职业作家)

小木虫水军秘书长


1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-06-12 16:52:28
肯定要检测有没有构建成功啊!:dnd:
cptbtptp,bcptdtptp (吃葡萄不吐葡萄皮,不吃葡萄倒吐葡萄皮)
2楼2010-06-12 16:23:02
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)

zcqcau(金币+2):谢谢 2010-06-12 19:03:56
构建重组载体,有三种方法可以来验证:1)通过酶切来验证,分析序列选择合适的内切酶酶切,通过分析比较酶切片段的大小来确定;2)通过PCR来验证,如果是长片段要选择LA taq,比较容易P出来;3)通过测序来验证,如果是长片段就两端各测一个反应,只要通过比较两端的序列是否正确,基本也就没有问题,不用全长测序的。祝实验顺利!
3楼2010-06-12 17:14:44
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)

我想问一下,这三种方法都是通用的吗?发文章都会认可么?
引用回帖:
Originally posted by srlee at 2010-06-12 17:14:44:
构建重组载体,有三种方法可以来验证:1)通过酶切来验证,分析序列选择合适的内切酶酶切,通过分析比较酶切片段的大小来确定;2)通过PCR来验证,如果是长片段要选择LA taq,比较容易P出来;3)通过测序来验证,如 ...

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4楼2010-06-12 19:05:04
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)

zcqcau(金币+2):非常感谢 2010-06-13 23:16:12
引用回帖:
Originally posted by zcqcau at 2010-06-12 19:05:04:
我想问一下,这三种方法都是通用的吗?发文章都会认可么?



呵呵,这个问题不知怎么该如何很好的回答你?我觉得,构建载体验证只是实验的一个小过程而已,至于方法只要是合理的正确的能达到实验目的都可以用上,不存在什么通用与否,只是比较常用。
5楼2010-06-12 19:28:28
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