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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于重组载体鉴定
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】关于重组载体鉴定 已有3人参与

现在在做重组载体构建，从酶切结果看，已经构建成功，现在不知道是否需要测序鉴定（片段较长，不知道值不值的测序）？
或者做PCR鉴定？


请虫友们帮忙
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1楼 2010-06-12 14:27:58
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)
zcqcau(金币+2):谢谢 2010-06-12 19:03:56
构建重组载体，有三种方法可以来验证：1）通过酶切来验证，分析序列选择合适的内切酶酶切，通过分析比较酶切片段的大小来确定；2）通过PCR来验证，如果是长片段要选择LA taq，比较容易P出来；3)通过测序来验证，如果是长片段就两端各测一个反应，只要通过比较两端的序列是否正确，基本也就没有问题，不用全长测序的。祝实验顺利！
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3楼2010-06-12 17:14:44
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pan琳lin

木虫 (职业作家)

小木虫水军秘书长

★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-06-12 16:52:28
肯定要检测有没有构建成功啊！:dnd:
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cptbtptp,bcptdtptp (吃葡萄不吐葡萄皮，不吃葡萄倒吐葡萄皮）
2楼2010-06-12 16:23:02
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
我想问一下，这三种方法都是通用的吗？发文章都会认可么？
引用回帖:
Originally posted by srlee at 2010-06-12 17:14:44:
构建重组载体，有三种方法可以来验证：1）通过酶切来验证，分析序列选择合适的内切酶酶切，通过分析比较酶切片段的大小来确定；2）通过PCR来验证，如果是长片段要选择LA taq，比较容易P出来；3)通过测序来验证，如 ...

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4楼2010-06-12 19:05:04
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)
zcqcau(金币+2):非常感谢 2010-06-13 23:16:12
引用回帖:
Originally posted by zcqcau at 2010-06-12 19:05:04:
我想问一下，这三种方法都是通用的吗？发文章都会认可么？



呵呵，这个问题不知怎么该如何很好的回答你？我觉得，构建载体验证只是实验的一个小过程而已，至于方法只要是合理的正确的能达到实验目的都可以用上，不存在什么通用与否，只是比较常用。
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5楼2010-06-12 19:28:28
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