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雪晴2013

金虫 (正式写手)

[求助] 原核pet28a表达的菌株诱导不出目的蛋白? 已有3人参与

表达np基因的部分片段,大概1100bp,克隆到pet28a上,在BL21中,IPTG1mm,37*,200r表达4h,然后取诱导、未诱导全菌直接跑的PAGE,看不出差异带,测序鉴定证明序列没有问题,为什么蛋白没有表达呢?
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 雪晴2013 at 2015-12-25 10:23:03
是BL21 DE3,我没说清楚,sorry...

做上请与沉淀的对照,降低诱导温度到26度至16度之间,降低IPTG浓度0.1mM甚至更低,增加诱导时间2-6小时之间。再试试
转化完的板子不要放在低温下,整个过程不要让表达菌受到低温刺激,再试试。
此座可言轻社稷,江山万里起风尘。
6楼2015-12-25 12:55:04
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bhl2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
过夜菌 培养到对数期之后进行诱导的吗

发自小木虫IOS客户端
2楼2015-12-24 16:15:33
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雪晴2013

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bhl2012 at 2015-12-24 16:15:33
过夜菌 培养到对数期之后进行诱导的吗

培养过夜后,1:100转种培养到对数生长期再诱导的
3楼2015-12-24 21:55:15
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你搞清楚!BL21不能表达PET,必须DE3的才可以,BL21 DE3 ,Rosetta DE3都行,用BL21鬼都出不来,根本没有T7启动子。
此座可言轻社稷,江山万里起风尘。
4楼2015-12-25 03:07:28
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