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葡聚糖凝胶纯化蛋白 已有1人参与
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| 本人用的G-75的凝胶过蛋白，蛋白我用水重悬的，然后冷离心，过滤膜，但是蛋白还是没有洗脱出来，我又重复了一次。然后我用0.1mol NaOH清洗，有蛋白被洗脱出来，就怀疑蛋白沉淀了易或是柱子堵住了，然后就重新装柱，再进样品，结果还是没有洗脱出来。然后发现4°剩余的蛋白已经有部分沉淀了，就怀疑蛋白质的稳定性比较差，希望各位高人给点建议对于蛋白质稳定性有增加？或者是我上述有什么不对的地方才导致的这种结果？ |
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hc-material
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【答案】应助回帖
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MR_zang(99503102代发): 金币+2, 谢谢应助，请继续为其他虫友解答噢！ 2015-12-21 09:33:24
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MR_zang: 金币+3 2015-12-21 14:14:42
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问题描述的不是很清楚。蛋白什么来源？用水重悬的是什么蛋白，纯度多少，杂质大概都有啥？没洗出来你是如何判断的?4°剩余的用水重悬的蛋白有部分沉淀，是温度降低溶解度降低么，还是蛋白变性了？ 建议，蛋白在纯水中的稳定性很差，建议重悬时使用一定浓度的缓冲液，比如50mM 的PBS。等。另外过凝胶过滤柱子，你的没洗出来是否是体积没洗够，祝顺利。 |
2楼2015-12-21 09:16:34
3楼2015-12-21 14:14:38
hc-material
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4楼2015-12-21 14:17:58
