24小时热门版块排行榜    

查看: 892  |  回复: 4

ldy1985

木虫 (正式写手)

[求助] 用葡聚糖凝胶G-200分离酶蛋白 已有1人参与

柱子为1*40,装柱体积25ml,上样量1ml,直接用纯化水进行洗脱,流速1ml/min,图上显示两个峰,第一个峰有酶活,第二个酶活低些,但是两个峰有交叉,这样应该怎么改进让两峰分开了。我试过减少上柱样,原来是上2ml的,现在改1ml了。这个收集后准备跑SDS凝胶电泳的。
顺便请教下,电泳中2-巯基乙醇可以用什么替代么?谢谢

用葡聚糖凝胶G-200分离酶蛋白
IMAG0696.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ldy1985: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2014-06-14 09:18:17
如果两个峰都有酶活力,那可能就是有两个酶了,毕竟每一种生物都有可能有一种以上的具备同一种功能的酶。换别的纯化方法可能会分离得更加好,比如说疏水层析和离子交换。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2014-06-14 01:41:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ldy1985

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-06-14 01:41:40
如果两个峰都有酶活力,那可能就是有两个酶了,毕竟每一种生物都有可能有一种以上的具备同一种功能的酶。换别的纯化方法可能会分离得更加好,比如说疏水层析和离子交换。

那就是说单靠凝胶层析是不可能完全分开这两种酶的吧
等材料回来了我再试试看
谢谢
3楼2014-06-14 09:18:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-14 21:00:09
楼主你可以试试减小流速看看能不能分开,减小流速可能峰形不太好看,你要是能知道这两种蛋白的分子量,换用其他的凝胶看看能不能分开,比如G25 G50   superdex 75等等
4楼2014-06-14 14:29:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
3楼: Originally posted by ldy1985 at 2014-06-14 09:18:10
那就是说单靠凝胶层析是不可能完全分开这两种酶的吧
等材料回来了我再试试看
谢谢...

好的
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2014-06-14 16:19:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ldy1985 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 化学工程321分求调剂 +11 大米饭! 2026-03-15 14/700 2026-03-17 17:11 by ruiyingmiao
[考研] 274求调剂0856材料化工 +13 z2839474511 2026-03-11 14/700 2026-03-17 16:51 by share_joy
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +4 梨花珞晚风 2026-03-17 4/200 2026-03-17 13:38 by houyaoxu
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 复试调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 331求调剂(0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 341求调剂 +4 番茄头--- 2026-03-10 4/200 2026-03-13 23:12 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
信息提示
请填处理意见