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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用葡聚糖凝胶G-200分离酶蛋白
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ldy1985

木虫 (正式写手)

[求助] 用葡聚糖凝胶G-200分离酶蛋白 已有1人参与

柱子为1*40，装柱体积25ml，上样量1ml，直接用纯化水进行洗脱，流速1ml/min，图上显示两个峰，第一个峰有酶活，第二个酶活低些，但是两个峰有交叉，这样应该怎么改进让两峰分开了。我试过减少上柱样，原来是上2ml的，现在改1ml了。这个收集后准备跑SDS凝胶电泳的。
顺便请教下，电泳中2-巯基乙醇可以用什么替代么？谢谢

用葡聚糖凝胶G-200分离酶蛋白
IMAG0696.jpg
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1楼 2014-06-12 10:59:00
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-14 21:00:09
楼主你可以试试减小流速看看能不能分开，减小流速可能峰形不太好看，你要是能知道这两种蛋白的分子量，换用其他的凝胶看看能不能分开，比如G25 G50   superdex 75等等
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4楼2014-06-14 14:29:36
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ldy1985: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2014-06-14 09:18:17
如果两个峰都有酶活力，那可能就是有两个酶了，毕竟每一种生物都有可能有一种以上的具备同一种功能的酶。换别的纯化方法可能会分离得更加好，比如说疏水层析和离子交换。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2014-06-14 01:41:40
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ldy1985

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-06-14 01:41:40
如果两个峰都有酶活力，那可能就是有两个酶了，毕竟每一种生物都有可能有一种以上的具备同一种功能的酶。换别的纯化方法可能会分离得更加好，比如说疏水层析和离子交换。

那就是说单靠凝胶层析是不可能完全分开这两种酶的吧
等材料回来了我再试试看
谢谢
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3楼2014-06-14 09:18:10
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
3楼: Originally posted by ldy1985 at 2014-06-14 09:18:10
那就是说单靠凝胶层析是不可能完全分开这两种酶的吧
等材料回来了我再试试看
谢谢...

好的
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2014-06-14 16:19:29
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