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ldy1985

木虫 (正式写手)

[求助] 用葡聚糖凝胶G-200分离酶蛋白 已有1人参与

柱子为1*40,装柱体积25ml,上样量1ml,直接用纯化水进行洗脱,流速1ml/min,图上显示两个峰,第一个峰有酶活,第二个酶活低些,但是两个峰有交叉,这样应该怎么改进让两峰分开了。我试过减少上柱样,原来是上2ml的,现在改1ml了。这个收集后准备跑SDS凝胶电泳的。
顺便请教下,电泳中2-巯基乙醇可以用什么替代么?谢谢

用葡聚糖凝胶G-200分离酶蛋白
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
3楼: Originally posted by ldy1985 at 2014-06-14 09:18:10
那就是说单靠凝胶层析是不可能完全分开这两种酶的吧
等材料回来了我再试试看
谢谢...

好的
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2014-06-14 16:19:29
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ldy1985: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2014-06-14 09:18:17
如果两个峰都有酶活力,那可能就是有两个酶了,毕竟每一种生物都有可能有一种以上的具备同一种功能的酶。换别的纯化方法可能会分离得更加好,比如说疏水层析和离子交换。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2014-06-14 01:41:40
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ldy1985

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-06-14 01:41:40
如果两个峰都有酶活力,那可能就是有两个酶了,毕竟每一种生物都有可能有一种以上的具备同一种功能的酶。换别的纯化方法可能会分离得更加好,比如说疏水层析和离子交换。

那就是说单靠凝胶层析是不可能完全分开这两种酶的吧
等材料回来了我再试试看
谢谢
3楼2014-06-14 09:18:10
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lihuan0525

金虫 (职业作家)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-14 21:00:09
楼主你可以试试减小流速看看能不能分开,减小流速可能峰形不太好看,你要是能知道这两种蛋白的分子量,换用其他的凝胶看看能不能分开,比如G25 G50   superdex 75等等
4楼2014-06-14 14:29:36
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