24小时热门版块排行榜    

查看: 5942  |  回复: 14

celine_21

新虫 (初入文坛)

[求助] 葡聚糖凝胶装柱时,流速很慢,何种原因?如何解决? 已有7人参与

大家好,这次是在装柱的过程中碰上了一个问题,装柱时流速就已经非常的慢,根本无法进行上样层析,希望有蛋白层析纯化的高手帮忙解决。
我选用GE的葡聚糖G-200凝胶进行装柱:柱子是内径1cm,高度55cm左右的柱子。按照一般的装柱方法,填料超声1min后搅拌后装柱。比对过装柱,操作过程并没有问题,但是填料沉积的过程从一开始就非常慢,沉降1个小时,才堆积不到2cm的高度。并且装柱完成后,测定了下流速,16分钟内,才0.7mL。这一流速是在太慢,根本无法进行层析。
这是何原因,如何才能解决?还希望各位高手能够提供。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

单体化合物

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
凝胶住,本来就是很慢的,你的正常

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2014-10-01 10:27:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

zwt369

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
最近也在装凝胶层析柱,我用的是G-25的,感觉沉降很快的啊,你说一小时才2cm真是很慢,会不会是你的干胶没有溶胀完全呢,或者把柱子下端拧开,一边流一边沉降呢?我也是新手,咱们可以互相交流!
学无止尽,永远努力!
2楼2014-09-29 10:22:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

celine_21

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zwt369 at 2014-09-29 10:22:40
最近也在装凝胶层析柱,我用的是G-25的,感觉沉降很快的啊,你说一小时才2cm真是很慢,会不会是你的干胶没有溶胀完全呢,或者把柱子下端拧开,一边流一边沉降呢?我也是新手,咱们可以互相交流!

填料是已经溶胀好,之前的人已经用过的,但他们的流速是具体是多少,报告中没有,无法参考。至于沉降也是一边流一边沉降的,结果就是一个小时才2cm.
3楼2014-09-29 10:31:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zwt369

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用过的就要再生啊,或者胶上面粘附了一些杂质导致沉降慢呢?
学无止尽,永远努力!
4楼2014-09-29 10:35:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

celine_21

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zwt369 at 2014-09-29 10:35:15
用过的就要再生啊,或者胶上面粘附了一些杂质导致沉降慢呢?

填料已经用20%乙醇4度保存的,我是准备像离子交换柱一样,先装好柱子后,再用碱洗,之后再平衡的。这样应该就没问题才是的。
5楼2014-09-29 10:42:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我用过G-25和G-200,G-200流速就是很慢,如果是新的还好,用过的流速真心慢的让人抓狂,可能是没有再生好,上面粘的杂志没除干净。不过沉降速度好像没发现有什么问题。
6楼2014-10-01 08:42:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以做个装柱器也可以把两个柱子加起来成简易装柱器。一次性加完过夜沉降。不够g系列的凝胶除了脱盐g25基本都淘汰了。推荐使用superdex系列

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-10-01 10:25:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

appleren

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
凝胶分离的效率不高,所以柱子要装长,走的慢才效果好,一般都是一滴一滴走,

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2014-10-01 10:44:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

appleren

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by appleren at 2014-10-01 10:44:46
凝胶分离的效率不高,所以柱子要装长,走的慢才效果好,一般都是一滴一滴走,

柱子下端沙板堵了,或者棉花赛多了?

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2014-10-01 10:47:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 celine_21 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +3 哈哈蛤? 2026-08-21 3/150 2026-08-21 10:31 by allmydream
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 我面上完蛋了 +5 且听虎啸 2026-08-20 5/250 2026-08-21 09:48 by climap
[基金申请] 让我中一个面上吧! +10 大萍1987 2026-08-20 12/600 2026-08-21 09:31 by 020100099
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +22 yaoyewhu2008 2026-08-20 24/1200 2026-08-21 07:44 by DanielDDDD
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
请填处理意见