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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 葡聚糖凝胶装柱时，流速很慢，何种原因？如何解决？
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celine_21

新虫 (初入文坛)

[求助] 葡聚糖凝胶装柱时，流速很慢，何种原因？如何解决？ 已有7人参与

大家好，这次是在装柱的过程中碰上了一个问题，装柱时流速就已经非常的慢，根本无法进行上样层析，希望有蛋白层析纯化的高手帮忙解决。
我选用GE的葡聚糖G-200凝胶进行装柱：柱子是内径1cm,高度55cm左右的柱子。按照一般的装柱方法，填料超声1min后搅拌后装柱。比对过装柱，操作过程并没有问题，但是填料沉积的过程从一开始就非常慢，沉降1个小时，才堆积不到2cm的高度。并且装柱完成后，测定了下流速，16分钟内，才0.7mL。这一流速是在太慢，根本无法进行层析。
这是何原因，如何才能解决？还希望各位高手能够提供。
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1楼 2014-09-29 10:12:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

单体化合物

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
凝胶住，本来就是很慢的，你的正常

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8楼2014-10-01 10:27:11
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普通回帖

zwt369

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最近也在装凝胶层析柱，我用的是G-25的，感觉沉降很快的啊，你说一小时才2cm真是很慢，会不会是你的干胶没有溶胀完全呢，或者把柱子下端拧开，一边流一边沉降呢？我也是新手，咱们可以互相交流！
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学无止尽，永远努力！
2楼2014-09-29 10:22:40
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celine_21

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zwt369 at 2014-09-29 10:22:40
最近也在装凝胶层析柱，我用的是G-25的，感觉沉降很快的啊，你说一小时才2cm真是很慢，会不会是你的干胶没有溶胀完全呢，或者把柱子下端拧开，一边流一边沉降呢？我也是新手，咱们可以互相交流！

填料是已经溶胀好，之前的人已经用过的，但他们的流速是具体是多少，报告中没有，无法参考。至于沉降也是一边流一边沉降的，结果就是一个小时才2cm.
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3楼2014-09-29 10:31:32
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zwt369

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用过的就要再生啊，或者胶上面粘附了一些杂质导致沉降慢呢？
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学无止尽，永远努力！
4楼2014-09-29 10:35:15
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celine_21

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zwt369 at 2014-09-29 10:35:15
用过的就要再生啊，或者胶上面粘附了一些杂质导致沉降慢呢？

填料已经用20%乙醇4度保存的，我是准备像离子交换柱一样，先装好柱子后，再用碱洗，之后再平衡的。这样应该就没问题才是的。
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5楼2014-09-29 10:42:40
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我用过G-25和G-200，G-200流速就是很慢，如果是新的还好，用过的流速真心慢的让人抓狂，可能是没有再生好，上面粘的杂志没除干净。不过沉降速度好像没发现有什么问题。
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6楼2014-10-01 08:42:42
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myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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可以做个装柱器也可以把两个柱子加起来成简易装柱器。一次性加完过夜沉降。不够g系列的凝胶除了脱盐g25基本都淘汰了。推荐使用superdex系列

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7楼2014-10-01 10:25:48
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appleren

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
凝胶分离的效率不高，所以柱子要装长，走的慢才效果好，一般都是一滴一滴走，

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9楼2014-10-01 10:44:46
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appleren

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by appleren at 2014-10-01 10:44:46
凝胶分离的效率不高，所以柱子要装长，走的慢才效果好，一般都是一滴一滴走，

柱子下端沙板堵了，或者棉花赛多了？

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10楼2014-10-01 10:47:28
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