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celine_21

新虫 (初入文坛)

[求助] 葡聚糖凝胶装柱时,流速很慢,何种原因?如何解决? 已有7人参与

大家好,这次是在装柱的过程中碰上了一个问题,装柱时流速就已经非常的慢,根本无法进行上样层析,希望有蛋白层析纯化的高手帮忙解决。
我选用GE的葡聚糖G-200凝胶进行装柱:柱子是内径1cm,高度55cm左右的柱子。按照一般的装柱方法,填料超声1min后搅拌后装柱。比对过装柱,操作过程并没有问题,但是填料沉积的过程从一开始就非常慢,沉降1个小时,才堆积不到2cm的高度。并且装柱完成后,测定了下流速,16分钟内,才0.7mL。这一流速是在太慢,根本无法进行层析。
这是何原因,如何才能解决?还希望各位高手能够提供。
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单体化合物

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
凝胶住,本来就是很慢的,你的正常

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2014-10-01 10:27:11
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普通回帖

zwt369

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
最近也在装凝胶层析柱,我用的是G-25的,感觉沉降很快的啊,你说一小时才2cm真是很慢,会不会是你的干胶没有溶胀完全呢,或者把柱子下端拧开,一边流一边沉降呢?我也是新手,咱们可以互相交流!
学无止尽,永远努力!
2楼2014-09-29 10:22:40
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celine_21

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zwt369 at 2014-09-29 10:22:40
最近也在装凝胶层析柱,我用的是G-25的,感觉沉降很快的啊,你说一小时才2cm真是很慢,会不会是你的干胶没有溶胀完全呢,或者把柱子下端拧开,一边流一边沉降呢?我也是新手,咱们可以互相交流!

填料是已经溶胀好,之前的人已经用过的,但他们的流速是具体是多少,报告中没有,无法参考。至于沉降也是一边流一边沉降的,结果就是一个小时才2cm.
3楼2014-09-29 10:31:32
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zwt369

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用过的就要再生啊,或者胶上面粘附了一些杂质导致沉降慢呢?
学无止尽,永远努力!
4楼2014-09-29 10:35:15
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celine_21

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zwt369 at 2014-09-29 10:35:15
用过的就要再生啊,或者胶上面粘附了一些杂质导致沉降慢呢?

填料已经用20%乙醇4度保存的,我是准备像离子交换柱一样,先装好柱子后,再用碱洗,之后再平衡的。这样应该就没问题才是的。
5楼2014-09-29 10:42:40
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我用过G-25和G-200,G-200流速就是很慢,如果是新的还好,用过的流速真心慢的让人抓狂,可能是没有再生好,上面粘的杂志没除干净。不过沉降速度好像没发现有什么问题。
6楼2014-10-01 08:42:42
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myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以做个装柱器也可以把两个柱子加起来成简易装柱器。一次性加完过夜沉降。不够g系列的凝胶除了脱盐g25基本都淘汰了。推荐使用superdex系列

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-10-01 10:25:48
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appleren

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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凝胶分离的效率不高,所以柱子要装长,走的慢才效果好,一般都是一滴一滴走,

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2014-10-01 10:44:46
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appleren

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by appleren at 2014-10-01 10:44:46
凝胶分离的效率不高,所以柱子要装长,走的慢才效果好,一般都是一滴一滴走,

柱子下端沙板堵了,或者棉花赛多了?

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10楼2014-10-01 10:47:28
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