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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量,ABI的机子、用的染料,扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子 已有2人参与

前期摸索中,普通PCR温度梯度60℃。
模板试过稀释了5倍和10倍,20ul体系,95℃5min,95℃10s,60℃ 10s,72℃ 15s,40个循环。
荧光定量产物电泳条带为目的条带,使用过八连管,染料是罗氏的。

荧光定量,ABI的机子、用的染料,扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子
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荧光定量,ABI的机子、用的染料,扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子-1
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苯苯兔

银虫 (初入文坛)

也不太懂,求高手出来解答
2楼2015-12-15 09:02:37
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

别沉啊,求大神啊
3楼2015-12-15 10:26:47
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

管子问题?染料问题?体系问题?模板问题?操作问题?
4楼2015-12-15 10:31:03
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GuanwenQ

新虫 (初入文坛)

5楼2015-12-15 10:40:01
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GuanwenQ

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 凯伦爱佳佳 at 2015-12-15 10:31:03
管子问题?染料问题?体系问题?模板问题?操作问题?

你的引物是自己设计的还是买的

发自小木虫Android客户端
6楼2015-12-15 10:41:24
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GuanwenQ

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
还有这个循环的时间似乎有点短,我自己做通常退火和延伸时间在30s~60s

发自小木虫Android客户端
7楼2015-12-15 10:50:24
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by GuanwenQ at 2015-12-15 10:40:01
说一下点的样呗

10ul mix  ,7ul dd水  ,2ul cDNA ,各0.5引物
8楼2015-12-15 10:51:54
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by GuanwenQ at 2015-12-15 10:50:24
还有这个循环的时间似乎有点短,我自己做通常退火和延伸时间在30s~60s

感觉这个时间,体现不出荧光定量机子相对于普通PCR的优越性。。。。原来用过罗氏480的,也是这个时间可以的。
9楼2015-12-15 10:53:35
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by GuanwenQ at 2015-12-15 10:41:24
你的引物是自己设计的还是买的
...

自己设计的,然后跑温度梯度,筛选出来的
10楼2015-12-15 10:54:33
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