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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量，ABI的机子、用的染料，扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量，ABI的机子、用的染料，扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子 已有2人参与

前期摸索中，普通PCR温度梯度60℃。
模板试过稀释了5倍和10倍，20ul体系，95℃5min，95℃10s，60℃ 10s，72℃ 15s，40个循环。
荧光定量产物电泳条带为目的条带，使用过八连管，染料是罗氏的。

荧光定量，ABI的机子、用的染料，扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子
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荧光定量，ABI的机子、用的染料，扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子-1
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荧光定量，ABI的机子、用的染料，扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子-2
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荧光定量，ABI的机子、用的染料，扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子-3
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1楼 2015-12-14 21:18:23
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苯苯兔

银虫 (初入文坛)
也不太懂，求高手出来解答
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2楼2015-12-15 09:02:37
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
别沉啊，求大神啊
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3楼2015-12-15 10:26:47
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
管子问题？染料问题？体系问题？模板问题？操作问题？
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4楼2015-12-15 10:31:03
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GuanwenQ

新虫 (初入文坛)
说一下点的样呗

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5楼2015-12-15 10:40:01
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GuanwenQ

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 凯伦爱佳佳 at 2015-12-15 10:31:03
管子问题？染料问题？体系问题？模板问题？操作问题？

你的引物是自己设计的还是买的

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6楼2015-12-15 10:41:24
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GuanwenQ

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
还有这个循环的时间似乎有点短，我自己做通常退火和延伸时间在30s~60s

发自小木虫Android客户端
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7楼2015-12-15 10:50:24
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by GuanwenQ at 2015-12-15 10:40:01
说一下点的样呗

10ul mix  ，7ul dd水  ，2ul cDNA ，各0.5引物
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8楼2015-12-15 10:51:54
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by GuanwenQ at 2015-12-15 10:50:24
还有这个循环的时间似乎有点短，我自己做通常退火和延伸时间在30s~60s

感觉这个时间，体现不出荧光定量机子相对于普通PCR的优越性。。。。原来用过罗氏480的，也是这个时间可以的。
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9楼2015-12-15 10:53:35
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by GuanwenQ at 2015-12-15 10:41:24
你的引物是自己设计的还是买的
...

自己设计的，然后跑温度梯度，筛选出来的
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10楼2015-12-15 10:54:33
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