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小-丑鱼

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对我而言可爱的她

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[求助] 奇怪的CT值数据，拿出来和大家探讨已有1人参与

荧光定量PCR实验，所用设备是ABI 7500.
所加模板和模板量均一致。

突变的CT    管家基因的CT
29.97       39.588
29.845       37.768
29.744       34.501
29.518       33.403
29.121       32.841
29.035       31.812
28.959       31.387                   突变NTC CT:46.7       管家：38.8

突变的CT    管家基因的CT
29.802 37.531
29.948 37.141
29.795 34.733
29.427 32.95
29.085 31.995
28.84 31.459
28.834 30.848                      突变NTC CT:Undetermined       管家：40.2

突变的CT    管家基因的CT
29.899 38.306
29.847 35.737
29.807 34.387
29.567 33.082
28.709 31.443
28.384 30.546
28.332 30.46                         突变NTC CT:Undetermined       管家：41.16

按照实际的实验位置统计数据，可以很明显的看出管家基因的CT值很怪异，自上至下递减而且幅度很大，同一列第1孔和第7孔的管家CT值相差极大。
实验室前一晚经过紫外杀菌，实验全过程无人员进入实验室，全部由我一人完成，实验操作自认为很小心了，但NTC还是如上，起了一点。

NTC起了代表污染了，但问题是，会引起这么大的差别吗？

通过查看以前做过的实验，同样位置的数据，意外发现管家基因CT值也是出现了自上至下递减而且幅度很大的现象，同一列第1孔和第8孔的管家CT值相差4-5不等，
是不是可以考虑是机器的因素？
虫子们有过这种情况吗？请多指教，谢谢！

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放不下的，除了手中的金箍棒，还有你的手。

1楼 2014-09-24 11:33:09

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

bwangel

银虫 (小有名气)

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★
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CT值太大了，模板浓度低了，这个结果不准，你没有事先做过扩增曲线么？要选择合理浓度

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