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小-丑鱼

捐助贵宾 (正式写手)

对我而言可爱的她

[求助] 奇怪的CT值数据,拿出来和大家探讨 已有1人参与

荧光定量PCR实验,所用设备是ABI 7500.
所加模板和模板量均一致。

突变的CT       管家基因的CT
29.97              39.588
29.845              37.768
29.744              34.501
29.518              33.403
29.121              32.841
29.035              31.812
28.959              31.387                    突变NTC CT:46.7        管家:38.8                    

突变的CT       管家基因的CT
29.802        37.531
29.948        37.141
29.795        34.733
29.427        32.95
29.085        31.995
28.84        31.459
28.834        30.848                         突变NTC CT:Undetermined        管家:40.2

突变的CT       管家基因的CT
29.899        38.306
29.847        35.737
29.807        34.387
29.567        33.082
28.709        31.443
28.384        30.546
28.332        30.46                           突变NTC CT:Undetermined        管家:41.16

按照实际的实验位置统计数据,可以很明显的看出管家基因的CT值很怪异,自上至下递减而且幅度很大,同一列第1孔和第7孔的管家CT值相差极大。
实验室前一晚经过紫外杀菌,实验全过程无人员进入实验室,全部由我一人完成,实验操作自认为很小心了,但NTC还是如上,起了一点。


NTC起了代表污染了,但问题是,会引起这么大的差别吗?

通过查看以前做过的实验,同样位置的数据,意外发现管家基因CT值也是出现了自上至下递减而且幅度很大的现象,同一列第1孔和第8孔的管家CT值相差4-5不等,
是不是可以考虑是机器的因素?
虫子们有过这种情况吗?请多指教,谢谢!
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放不下的,除了手中的金箍棒,还有你的手。
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bwangel

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
CT值太大了,模板浓度低了,这个结果不准,你没有事先做过扩增曲线么?要选择合理浓度
2楼2014-09-24 12:17:47
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