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凯伦爱佳佳金虫 (正式写手)
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荧光定量，ABI的机子、用的染料，扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子已有2人参与
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前期摸索中，普通PCR温度梯度60℃。 模板试过稀释了5倍和10倍，20ul体系，95℃5min，95℃10s，60℃ 10s，72℃ 15s，40个循环。 荧光定量产物电泳条带为目的条带，使用过八连管，染料是罗氏的。  P51212-170027.jpg  P51212-171609.jpg  P51212-171620.jpg  P51214-121552.jpg |
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5楼2015-12-15 10:40:01
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7楼2015-12-15 10:50:24
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熔解曲线的特异性很低，也就是扩增产物不单一，那么可能是引物设计的特异性不好，cycle没有跑好，还有就是cDNA降解，cycle的话要不然就是酶量问题，要不然就是cycle的周期扩增曲线不平滑，也就是有样品没有没有参与到某几个cycle里，但是我觉得如果mix是可靠的话，那么cycle时间出问题的可能性比较高。 发自小木虫Android客户端 |
11楼2015-12-15 11:03:28
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18楼2015-12-15 16:11:15
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19楼2015-12-15 16:12:27
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