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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
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GuanwenQ

新虫 (初入文坛)

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9楼: Originally posted by 凯伦爱佳佳 at 2015-12-15 10:53:35
感觉这个时间,体现不出荧光定量机子相对于普通PCR的优越性。。。。原来用过罗氏480的,也是这个时间可以的。...

熔解曲线的特异性很低,也就是扩增产物不单一,那么可能是引物设计的特异性不好,cycle没有跑好,还有就是cDNA降解,cycle的话要不然就是酶量问题,要不然就是cycle的周期扩增曲线不平滑,也就是有样品没有没有参与到某几个cycle里,但是我觉得如果mix是可靠的话,那么cycle时间出问题的可能性比较高。

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11楼2015-12-15 11:03:28
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文萱

金虫 (初入文坛)

善待他人,智慧人生
12楼2015-12-15 12:35:09
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

大神在哪里~~
13楼2015-12-15 14:44:18
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by GuanwenQ at 2015-12-15 11:03:28
熔解曲线的特异性很低,也就是扩增产物不单一,那么可能是引物设计的特异性不好,cycle没有跑好,还有就是cDNA降解,cycle的话要不然就是酶量问题,要不然就是cycle的周期扩增曲线不平滑,也就是有样品没有没有参与 ...

但是我用产物跑电泳,条带也只有一个啊,我的产物大小在200bp左右,唯一就是电泳的条带有点宽。。。
14楼2015-12-15 16:02:14
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 文萱 at 2015-12-15 12:35:09
引物不特异

跑普通PCR的时候,感觉引物特异性还行啊
15楼2015-12-15 16:02:57
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文萱

金虫 (初入文坛)

荧光定量引物跟普通pcr引物不一样的,跑的条件也不一样。荧光定量比普通pcr更灵敏,你初步试的时候就要在荧光定量pcr仪上试,你根据这次结果再调整下温度,时间等等,有的时候不是一次就好的,

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善待他人,智慧人生
16楼2015-12-15 16:07:17
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 文萱 at 2015-12-15 16:07:17
荧光定量引物跟普通pcr引物不一样的,跑的条件也不一样。荧光定量比普通pcr更灵敏,你初步试的时候就要在荧光定量pcr仪上试,你根据这次结果再调整下温度,时间等等,有的时候不是一次就好的,
...

好的,我在优化下条件
17楼2015-12-15 16:10:32
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GuanwenQ

新虫 (初入文坛)

如果电泳条带比较单一,那扩增产物可能是长度类似但是CG含量不单一的片段,那么这样看来或许是引物设计的特异性问题

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18楼2015-12-15 16:11:15
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GuanwenQ

新虫 (初入文坛)

听说有些定量PCR试剂盒挑机子,不知道你这个有没有这种问题

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19楼2015-12-15 16:12:27
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by GuanwenQ at 2015-12-15 16:11:15
如果电泳条带比较单一,那扩增产物可能是长度类似但是CG含量不单一的片段,那么这样看来或许是引物设计的特异性问题

难道前面不平滑的部分都是别的片段么
20楼2015-12-15 17:11:07
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