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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量,ABI的机子、用的染料,扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子已有2人参与

前期摸索中,普通PCR温度梯度60℃。
模板试过稀释了5倍和10倍,20ul体系,95℃5min,95℃10s,60℃ 10s,72℃ 15s,40个循环。
荧光定量产物电泳条带为目的条带,使用过八连管,染料是罗氏的。

荧光定量,ABI的机子、用的染料,扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子
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荧光定量,ABI的机子、用的染料,扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子-1
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by GuanwenQ at 2015-12-15 11:03:28
熔解曲线的特异性很低,也就是扩增产物不单一,那么可能是引物设计的特异性不好,cycle没有跑好,还有就是cDNA降解,cycle的话要不然就是酶量问题,要不然就是cycle的周期扩增曲线不平滑,也就是有样品没有没有参与 ...

但是我用产物跑电泳,条带也只有一个啊,我的产物大小在200bp左右,唯一就是电泳的条带有点宽。。。
14楼2015-12-15 16:02:14
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苯苯兔

银虫 (初入文坛)

也不太懂,求高手出来解答
2楼2015-12-15 09:02:37
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

别沉啊,求大神啊
3楼2015-12-15 10:26:47
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

管子问题?染料问题?体系问题?模板问题?操作问题?
4楼2015-12-15 10:31:03
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