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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量，ABI的机子、用的染料，扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量，ABI的机子、用的染料，扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子 已有2人参与

前期摸索中，普通PCR温度梯度60℃。
模板试过稀释了5倍和10倍，20ul体系，95℃5min，95℃10s，60℃ 10s，72℃ 15s，40个循环。
荧光定量产物电泳条带为目的条带，使用过八连管，染料是罗氏的。

荧光定量，ABI的机子、用的染料，扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子
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荧光定量，ABI的机子、用的染料，扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子-1
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荧光定量，ABI的机子、用的染料，扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子-2
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荧光定量，ABI的机子、用的染料，扩增曲线和熔解曲线怎么成了这个样子-3
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1楼 2015-12-14 21:18:23
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by GuanwenQ at 2015-12-15 11:03:28
熔解曲线的特异性很低，也就是扩增产物不单一，那么可能是引物设计的特异性不好，cycle没有跑好，还有就是cDNA降解，cycle的话要不然就是酶量问题，要不然就是cycle的周期扩增曲线不平滑，也就是有样品没有没有参与 ...

但是我用产物跑电泳，条带也只有一个啊，我的产物大小在200bp左右，唯一就是电泳的条带有点宽。。。
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14楼2015-12-15 16:02:14
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苯苯兔

银虫 (初入文坛)
也不太懂，求高手出来解答
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2楼2015-12-15 09:02:37
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
别沉啊，求大神啊
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3楼2015-12-15 10:26:47
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
管子问题？染料问题？体系问题？模板问题？操作问题？
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4楼2015-12-15 10:31:03
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