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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 构建表达载体出现问题
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马玛丽

新虫 (初入文坛)

[交流] 构建表达载体出现问题

我有一条目的基因序列，同时构建植物表达载体和酵母表达载体，测序结果回来后，酵母表达载体的那条带酶切位点的序列完全正确，植物表达载体带酶切位点的序列怎么做都不对，或多或少的出现点突变，这是什么原因造成的，该怎么修正，使实验继续进行

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1楼 2015-12-06 12:18:04
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xhp_1638

铜虫 (小有名气)
★
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有没有可能是目的片段扩增过程产生的点突变？！
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发展才是硬道理！
2楼2015-12-06 17:22:49
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wjasaa

金虫 (初入文坛)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-24 22:21:48
如果是相同的PCR产物，用同样的酶切位点插入不同的载体，那突变多半来自PCR产物，可以尝试再测两个单克隆试试。
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WWW.ABMGOOD.COM
3楼2015-12-07 12:24:03
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科学小覃

木虫 (正式写手)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-24 22:22:04
不可太果断的说突变了，有可能是测序的问题，要认真检查测序峰图，同时分析酶切条带。
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生物科学
4楼2015-12-07 13:01:25
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生科深似海

新虫 (小有名气)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-24 22:22:19
有的重组质粒带有毒性  要么挑的阳性克隆在酶切位点附近总是有突变  要么就是阴性克隆  可以换个表达载体或者是感受态细胞

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5楼2015-12-07 19:49:11
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luweidong401

金虫 (著名写手)
★
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用高保真的Taq酶重新PCR，做不出来才怪呢!

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6楼2015-12-07 21:20:27
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-24 22:22:40
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7楼2015-12-08 21:03:36
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李诗洁2011

新虫 (初入文坛)
★
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用比pfu酶保真性好5倍的Q5DNA聚合酶。。。保证没有突变。

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8楼2015-12-08 23:26:23
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)
★
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接着调单克隆,直到测序结果没有突变的为止啦！

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9楼2015-12-08 23:28:25
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药到命除0

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 李诗洁2011 at 2015-12-08 23:26:23
用比pfu酶保真性好5倍的Q5DNA聚合酶。。。保证没有突变。

GXL呢

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10楼2015-12-08 23:38:03
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