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shuangzi8761

银虫 (著名写手)

[求助] 关于水稻RNAi载体pHANNIBAL双酶切的问题请教 已有1人参与

小弟最近做水稻RNAi,用pHANNIBAL构建中间载体,pCAMBIA1300做表达载体,正反片段为200bp,选择插入位点正向为EcoR1&Xho1,反向为Hind3&Xba1, 两个载体连接选用Pst1和Sac1。问题在用Pst1和Sac1双酶切pHANNIBAL时,电泳出现了四条带。。。。。。双酶切后应该为3300bp大小。。。这两个酶在载体上都是单一的酶切位点,为何出现了四条带。。。。插入的RNAi基因片段上也没有这俩酶切位点啊,非常奇怪,请各位虫友指点一二。。。不胜感谢

电泳图第一泳道为PLUS2的maker,从上到下为8k 5k 3k 2k 1k 750bP 500bp 250bp 100bp
第二泳道为pCAMBIA1300的Pst1和Sac1双酶切
第三泳道为pHANNIBAL的Pst1和Sac1双酶切

图为pHANNIBAL图谱

关于水稻RNAi载体pHANNIBAL双酶切的问题请教
pHANNIBAL_1x.png


关于水稻RNAi载体pHANNIBAL双酶切的问题请教-1
QH{@5SM__]Q[W3TUZX7O5CV.jpg
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-25 20:05:26
shuangzi8761: 金币+2, ★有帮助 2014-05-26 09:21:06
你有没有检测空载体?有可能有插入了,插入片段测序了没?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-05-25 19:06:00
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-25 19:06:00
你有没有检测空载体?有可能有插入了,插入片段测序了没?

空载体是向Biovector公司买的 自己基因插入后做了PCR和酶切验证 是没问题的
3楼2014-05-26 09:20:34
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by shuangzi8761 at 2014-05-26 09:20:34
空载体是向Biovector公司买的 自己基因插入后做了PCR和酶切验证 是没问题的...

拿到载体后做酶切检测没?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-05-26 09:50:42
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-26 09:50:42
拿到载体后做酶切检测没?
...

没有呢啊 想着既然从公司买的 没有问题吧
5楼2014-05-26 11:02:19
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by shuangzi8761 at 2014-05-26 11:02:19
没有呢啊 想着既然从公司买的 没有问题吧...

那个难说的,他们也是从别人那收集的,不一定没问题哦

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-05-26 11:04:42
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-26 11:04:42
那个难说的,他们也是从别人那收集的,不一定没问题哦
...

五点多大洋买的呀。。。。我切一个试试 看看怎么样 多谢了
7楼2014-05-26 11:18:33
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-26 11:04:42
那个难说的,他们也是从别人那收集的,不一定没问题哦
...

我用pst1和sac1分别单酶切 没问题 双酶切也没问题 我的插入的基因里面也没有这俩酶切位点 奇怪了。。。。。。。
8楼2014-05-27 09:01:44
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