24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1862  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

shuangzi8761

银虫 (著名写手)

[求助] 关于水稻RNAi载体pHANNIBAL双酶切的问题请教 已有1人参与

小弟最近做水稻RNAi,用pHANNIBAL构建中间载体,pCAMBIA1300做表达载体,正反片段为200bp,选择插入位点正向为EcoR1&Xho1,反向为Hind3&Xba1, 两个载体连接选用Pst1和Sac1。问题在用Pst1和Sac1双酶切pHANNIBAL时,电泳出现了四条带。。。。。。双酶切后应该为3300bp大小。。。这两个酶在载体上都是单一的酶切位点,为何出现了四条带。。。。插入的RNAi基因片段上也没有这俩酶切位点啊,非常奇怪,请各位虫友指点一二。。。不胜感谢

电泳图第一泳道为PLUS2的maker,从上到下为8k 5k 3k 2k 1k 750bP 500bp 250bp 100bp
第二泳道为pCAMBIA1300的Pst1和Sac1双酶切
第三泳道为pHANNIBAL的Pst1和Sac1双酶切

图为pHANNIBAL图谱

关于水稻RNAi载体pHANNIBAL双酶切的问题请教
pHANNIBAL_1x.png


关于水稻RNAi载体pHANNIBAL双酶切的问题请教-1
QH{@5SM__]Q[W3TUZX7O5CV.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuangzi8761

银虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-26 09:50:42
拿到载体后做酶切检测没?
...

没有呢啊 想着既然从公司买的 没有问题吧
5楼2014-05-26 11:02:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-25 20:05:26
shuangzi8761: 金币+2, 有帮助 2014-05-26 09:21:06
你有没有检测空载体?有可能有插入了,插入片段测序了没?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-05-25 19:06:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuangzi8761

银虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-25 19:06:00
你有没有检测空载体?有可能有插入了,插入片段测序了没?

空载体是向Biovector公司买的 自己基因插入后做了PCR和酶切验证 是没问题的
3楼2014-05-26 09:20:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by shuangzi8761 at 2014-05-26 09:20:34
空载体是向Biovector公司买的 自己基因插入后做了PCR和酶切验证 是没问题的...

拿到载体后做酶切检测没?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-05-26 09:50:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +15 河南农业大学-能 2026-04-14 15/750 2026-04-20 12:39 by Equinoxhua
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 5/250 2026-04-20 10:47 by YuY66
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 297,工科调剂? +11 河南农业大学-能 2026-04-14 11/550 2026-04-19 20:07 by Equinoxhua
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-19 17:16 by 中豫男
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂推荐 +9 小聂爱学习 2026-04-14 9/450 2026-04-19 17:03 by 中豫男
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +10 lzmk 2026-04-14 11/550 2026-04-19 16:42 by 中豫男
[考研] 0854求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-15 27/1350 2026-04-19 01:59 by 烟雨流涯
[考研] 297,工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 22408 312求调剂 +24 门路摸摸 2026-04-14 26/1300 2026-04-18 13:04 by wunaiy88
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考研] 一志愿沪9,生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
信息提示
请填处理意见