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罗淑芬

新虫 (小有名气)

[求助] 关于酶活的计算 已有1人参与

我测的是己糖激酶,想请教下怎么计算酶活的,我的方法如下:
1)100ul酶液+1ml 反应液(50mM Tris-HCl pH8.0 含4mM MgCl2,2.5mM ATP,0.33μM NAD+,1 U葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,1mM 葡萄糖)
2)于37℃,波长340nm下进行吸光值扫描
3)取直线段1min的吸光值变化

以每分钟产生的NADH来计算酶活,我想知道,我怎么计算这个每分钟产生的NADH啊?其实就是怎么计算酶活,没弄明白。
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sytucom

版主 (知名作家)

日光之下,并无新事

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个要测量标准曲线的,才可以进行对照。
已有的事,后必再有,已行的事,后必再行。
2楼2015-11-30 10:47:39
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罗淑芬

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sytucom at 2015-11-30 10:47:39
这个要测量标准曲线的,才可以进行对照。

你的意思是说,我用几个浓度的标品也做一个这样的连续扫描,都取1min 的吸光值变化,做成标准曲线,然后再计算?
3楼2015-11-30 11:46:09
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sytucom

版主 (知名作家)

日光之下,并无新事

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
罗淑芬: 金币+15, 得到求助,谢谢 2015-11-30 13:00:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by 罗淑芬 at 2015-11-30 11:46:09
你的意思是说,我用几个浓度的标品也做一个这样的连续扫描,都取1min 的吸光值变化,做成标准曲线,然后再计算?...

楼主果然聪明人,正解。
已有的事,后必再有,已行的事,后必再行。
4楼2015-11-30 11:48:33
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罗淑芬

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sytucom at 2015-11-30 11:48:33
楼主果然聪明人,正解。...

好的,秒懂,谢谢
5楼2015-11-30 12:59:21
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1250462609

新虫 (初入文坛)

楼主,能问下你测得什么的材料的己糖激酶么,提取方法是什么,谢谢
6楼2015-12-25 12:37:21
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风恋邱

铁虫 (正式写手)

你要先做一个NADPH标曲,然后就是,不是以NADH为对照吧,我是以NADPH为对照。先计算出NADPH的量,在算出酶活力与酶比活力
7楼2016-10-21 17:09:56
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引用回帖:
1楼: Originally posted by 罗淑芬 at 2015-11-30 10:32:01
我测的是己糖激酶,想请教下怎么计算酶活的,我的方法如下:
1)100ul酶液+1ml 反应液(50mM Tris-HCl pH8.0 含4mM MgCl2,2.5mM ATP,0.33μM NAD+,1 U葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,1mM 葡萄糖)
2)于37℃,波长340n ...



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8楼2018-07-24 08:17:55
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