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futaylor

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于土壤酶活测定的问题

最近测土壤脲酶活性,用的方法如下:
  称取5g土样于50ml三角瓶中,加1ml甲苯,振荡均匀,15min后加10ml10%尿素溶液和20ml PH 6.7柠檬酸盐缓冲溶液,摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。培养结束后过滤,过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中,再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液,随加随摇匀。20min后显色,定容。1h内在分光光度计与578nm波长处比色。(靛酚的蓝色在1h内保持稳定)。
  标准曲线制作:在测定样品吸光值之前,分别取0、1、3、5、7、9、11、13ml氮工作液,移于50ml容量瓶中,然后补加蒸馏水至20ml。再加入4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液,随加随摇匀。20min后显色,定容。1h内在分光光度计上于578nm波长处比色。然后以氮工作液浓度为横坐标,吸光值为纵坐标,绘制标准曲线。
注意事项:
1、每一个样品应该做一个无基质对照,以等体积的蒸馏水代替基质,其他操作与样品实验相同,以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。
2、整个实验设置一个无土对照,不加土样,其他操作与样品实验相同,以检验试剂纯度和基质自身分解。
3、如果样品吸光值超过标曲的最大值,则应该增加分取倍数或减少培养的土样
四、结果计算: 以24小时后1g土壤中NH3-N的毫克数表示土壤脲酶活性(Ure)。
Ure=(a样品-a无土-a无基质)×V×n/m

式中:a样品为样品吸光值由标准曲线求得的NH3-N毫克数;
      a无土为无土对照吸光值由标准曲线求得的NH3-N毫克数;
      a无基质为无基质对照吸光值由标准曲线求得的NH3-N毫克数;
      V为显色液体积;n为分取倍数,浸出液体积/吸取滤液体积;m表示烘干土重


在最后的计算时,请问显色液的体积是多少?浸出液体积和吸取滤液体积又分别是多少呢?
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chen_sm

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

显色液体积就是你用的容量瓶的体积50ml,浸出液体积就是你加入的尿素和缓冲液的体积即30ml,吸取滤液体积就是你取的进行比色的滤液的体积即1ml。
另外加一句,你的最后计算公式可能有点问题,我看的《土壤酶及其测定方法》中好像是不用算显色液体积V的,直接根据比色结果乘以分取倍数除以土质量就行了。
2楼2013-12-08 14:24:31
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小米阳光

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chen_sm at 2013-12-08 14:24:31
显色液体积就是你用的容量瓶的体积50ml,浸出液体积就是你加入的尿素和缓冲液的体积即30ml,吸取滤液体积就是你取的进行比色的滤液的体积即1ml。
另外加一句,你的最后计算公式可能有点问题,我看的《土壤酶及其测 ...

所有的酶计算公式都是一样的吗?

发自小木虫IOS客户端
3楼2018-08-15 17:26:01
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小米阳光

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小米阳光 at 2018-08-15 17:26:01
所有的酶计算公式都是一样的吗?
...

应该要乘显色液体积吧,如果不乘的话,没办法把ml约掉吧

发自小木虫IOS客户端
4楼2018-08-15 17:29:14
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