| 查看: 4845 | 回复: 3 | |||
diguoxueye金虫 (正式写手)
|
[交流]
关于果蔬中过氧化物酶与过氧化氢酶活力测定 已有1人参与
|
|
我在做POD和CAT酶活力测定时发现了一些异常现象。我是采用测吸光值测定结果的。发现吸光值呈现异常变化情况。比如测CAT时发现，有的吸光值不断的下降，有的样品的吸光值先在测定的最初1min内急剧下降，随后，有的是下降速度明显降低，有的是呈增加的趋势。还有的样品是吸光值在前1分钟内先升高，随后，呈现规律的下降趋势。测定POD也出现了同样的问题。但是，以前测定POD的时候，曲线的R平方值非常大，基本上都是0.99以上的。现在和以前的最大差别在于，两次的样品不同，但是都属于同一个品种，现在测定的酶活比以前测定的小很多。 补充一点：我的分离方式采用的是过滤，而不是离心。主要是因为发现离心的效果比较差，又没有高速离心机。最后发现过滤的溶液还是比较澄清的。 下面的是POD的测定方法 7、过氧化物酶活力测定 (1) 试剂 0.02mol/L KH2PO4溶液，0.1molPH6.0磷酸缓冲液，反应混合液（取0.1mol/LPH6.0磷酸缓冲液50mL，加入愈创木酚0.028mL，于磁力搅拌器加热搅拌至溶解，待溶液冷却后，加入30%过氧化氢0.019mL，混合均匀，于冰箱中保存）。 (2) 试验方法 a) 粗酶液的提取：称取1.0g植物组织，放入研钵中，加入少量石英砂和0.02mol/L KH2PO4溶液5mL，冰浴研磨成匀浆，于4000r/min下离心15min，上清液转入25mL容量瓶中。所剩沉淀再用5mL0.02mol/L KH2PO4溶液提取一次，上清液并入容量瓶，定容至25mL，保存在冰箱备用。 b) POD测定：取比色杯2只，一只加入反应混合液3mL和0.02mol/L KH2PO4溶液1mL，作为调零空白；另一只加入反应混合液3mL和上述粗酶液1mL（如酶活力过高可稀释），立即开启秒表计时，于分光光度计470nm处比色测定吸光度，每隔1min读数一次。 c) 结果计算：以每分钟内OD470变化0.01为1个POD活力单位，计算活力： POD活力（U/gFW/min）= 式中：△OD470——反应时间内吸光度的变化量； W——植物组织鲜重（g）； t——反应时间（min）； Vt——提取酶液总体积（mL）； Vs——测定时取用酶液体积（mL）。 CAT测定采用 样品提取是采用的磷酸盐缓冲液，测定吸光值时，2.9mLTris-HCl缓冲液+0.05mL750mmol/L过氧化氢+0.05mol/L粗酶液，在240nm下测定吸光值。每30s测定一次吸光值。 |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
你好青橄榄» 猜你喜欢
淮北师范大学生物医药还有11个调剂名额和资源环境还有10调剂名额，欢迎大家赶紧调剂！
已经有0人回复
-
食物营养学 电子版
已经有0人回复
-
食品科学论文润色/翻译怎么收费?
已经有111人回复
-
电子科技大学（深圳）高等研究院陈明豪课题组招收推免硕士研究生
已经有816人回复
-
金铜纳米合成
已经有0人回复
-
求助1977版中国药典，非常感谢！！！
已经有1人回复
-
萝卜干防腐 馊酸味 微生物
已经有0人回复
-
求助bncc来源的金黄色葡萄球菌批号
已经有0人回复
-
国自然和省自然祈祷
已经有52人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 愈创木酚法过氧化物酶测定的时候产生了很多气泡是否会干扰实验的测定？
已经有7人回复
- 在生物实验中使用辣根过氧化物酶，请问没反应，是怎么回事？
已经有4人回复
- 辣根过氧化物酶催化过氧化氢的机理，求助大神！！
已经有12人回复
- 过氧化物酶测定为什么不显色呢，我用的是愈创木酚法
已经有15人回复
- 求助：过氧化物酶提取及活性测定，颜色、吸光度都无变化
已经有9人回复
- 求测定过漆酶、木素过氧化物酶、锰过氧化物酶的方法
已经有25人回复
- CAT或POD过氧化氢酶和过氧化物酶的单位是什么？
已经有7人回复
- 黄孢子原毛平革菌木素过氧化物酶，锰过氧化物酶，漆酶酶活测定
已经有58人回复
- GPx(谷胱甘肽过氧化物酶）活性检测中的疑问
已经有9人回复
- 辣根过氧化物酶（HRP）酶活检测方法
已经有82人回复
- 辣根过氧化物酶色原底物
已经有4人回复
- 【求助/交流】过氧化物酶活性的测定()
已经有6人回复
2楼2014-12-19 10:16:43
你好青橄榄
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 238
- 散金: 20
- 帖子: 43
- 在线: 15.9小时
- 虫号: 3071086
- 注册: 2014-03-19
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
3楼2015-11-10 18:34:11
4楼2019-01-11 14:57:18
20