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山寨马克思

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于抗坏血酸代谢酶活测定

小弟最近想测抗坏血酸代谢相关酶活性(APX AAO DHAR等),但是由于鄙人初次接触此类实验,所以很是迷惑,还望各位大侠不吝赐教,小弟万分感激。用分光光度法测定,主要疑问有一下几点:
1 在测定酶活的时候,一般连续测定多长时间比较合适?
2 测定的时候,是直接将反应体系的各物质直接加到比色杯中的,是在加入酶液后就计时测定还是需要等待多长时间待反应后再测定?如需等待反应一段时间后,这个时间多长合适?
3 测定后,有一个吸光度的变化,有的酶的趋势是减小的,有的是增加的,如何初步判断所测出来的吸光度的变化趋势是怎样的?还有小弟所测得的吸光度变化均不大,平均0.001-0.003这是由于什么原因造成的?这种结果是否准确?
4 按照以每毫克组织蛋白每分钟催化1μmol底物氧化的酶量定义为一个酶活力单位(u),用u/mg.protein表示酶活性测定完后如何计算酶活性。
5 另外,哪位好心人能给我《植物生理学实验教程》张以顺 黄霞编著的电子书么?
希望各位大侠能给小弟指教一二,能详细的解答小弟的疑问,或者提供有详细步骤和原理的protocol,万分感激~
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