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山寨马克思

铜虫 (小有名气)

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专业: 果树学

[求助] 关于抗坏血酸代谢酶活测定

小弟最近想测抗坏血酸代谢相关酶活性（APX AAO DHAR等），但是由于鄙人初次接触此类实验，所以很是迷惑，还望各位大侠不吝赐教，小弟万分感激。用分光光度法测定，主要疑问有一下几点：
1 在测定酶活的时候，一般连续测定多长时间比较合适？
2 测定的时候，是直接将反应体系的各物质直接加到比色杯中的，是在加入酶液后就计时测定还是需要等待多长时间待反应后再测定？如需等待反应一段时间后，这个时间多长合适？
3 测定后，有一个吸光度的变化，有的酶的趋势是减小的，有的是增加的，如何初步判断所测出来的吸光度的变化趋势是怎样的？还有小弟所测得的吸光度变化均不大，平均0.001-0.003这是由于什么原因造成的？这种结果是否准确？
4 按照以每毫克组织蛋白每分钟催化1μmol底物氧化的酶量定义为一个酶活力单位(u)，用u/mg.protein表示酶活性测定完后如何计算酶活性。
5 另外，哪位好心人能给我《植物生理学实验教程》张以顺黄霞编著的电子书么？
希望各位大侠能给小弟指教一二，能详细的解答小弟的疑问，或者提供有详细步骤和原理的protocol，万分感激~

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