| 查看: 2883 | 回复: 24 | ||||
[求助]
目的条带跑不开，是怎么了？？？
|
||||
|
我在做植物的内生真菌，我先简单说下，我提了植物总的DNA，用真菌通用引物ITS1F-ITS4跑的pcr，目的是扩增总DNA里边的真菌序列，一般目的条带是在500-750bp之间，根据文献，这个通用引物会同时扩增出植物的序列，但是扩增出来的植物序列都会比真菌的长。 目前我遇到的问题是：我能扩增出多条带，但是条带跑不开，或者说跑的不是很开，不知道怎么办？因为我还要切胶回收，做蓝白斑筛选，这样难度就很大。我用了5ulpcr产物跑的胶，会不会是产物点样太多，还是我的pcr循环了35次，太多了吗？我只想让这些条带分的清晰点，不要太多融合，另外我每次跑的条带都不直，我做胶已经很按要求了，是不是我点样的技术问题，还是电泳液要换新的？这三张图是我在调试不同退火温度的    发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
wcq吴超群» 猜你喜欢
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有200人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 重组的质粒跑胶怎么会如此诡异？
已经有3人回复
- 深圳公立医院门诊挂号费是多少？都是18元吗？
已经有7人回复
- 人这一生为什么要努力？
已经有62人回复
- 骗术，太恐怖了！安全第一 ，男女生一定要看，看完千万要转告亲朋好友！
已经有29人回复
- 很多人会错失爱情，为什么？看完这个文章才觉得需要学习的不仅仅是数理化
已经有15人回复
- 【求助/交流】电泳问题，非常奇怪，急求解决！
已经有23人回复
liweiwaxmc
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 270.1
- 散金: 5
- 红花: 2
- 帖子: 217
- 在线: 36.4小时
- 虫号: 1262433
- 注册: 2011-04-11
- 专业: 细胞信号转导
|
凝胶分离就像筛子一样！如果筛子分不开东西！只要你的样品没有太大问题！一般都会调整筛子孔径大小！可以调整胶浓度看看！ 发自小木虫IOS客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
14楼2015-11-03 23:59:07
2楼2015-11-03 20:19:50
3楼2015-11-03 20:22:39
4楼2015-11-03 20:23:39
5楼2015-11-03 20:23:58
6楼2015-11-03 20:30:07
7楼2015-11-03 20:30:39
ufo29119690
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1153.8
- 红花: 2
- 帖子: 55
- 在线: 51.7小时
- 虫号: 3549719
- 注册: 2014-11-20
- 性别: GG
- 专业: 兽医学
8楼2015-11-03 20:45:13
9楼2015-11-03 23:06:41
biostar2009
专家顾问 (正式写手)
-
专家经验: +220 - MolEPI: 20
- 应助: 231 (大学生)
- 金币: 10431.9
- 散金: 387
- 红花: 63
- 帖子: 540
- 在线: 151.9小时
- 虫号: 2811882
- 注册: 2013-11-19
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
|
你已经发现问题了，同理没跑开为什么没想到你的样品DNA也太多了？克隆为目的的根本不需要这么多。如果主带明显多于其他条带，全部直接克隆，挑出你想要的大小也相当容易。 发自小木虫Android客户端 |
10楼2015-11-03 23:08:17
10