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惠子934

木虫 (正式写手)

增大胶的浓度,同时减小电压,多跑一会,这样跑出来得Mark很好看,还分的开,

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11楼2015-11-03 23:11:39
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满天星110

新虫 (小有名气)

胶的浓度有点低,你用的M太大了,没必要那么大的,条带不平整应该是你梳子的问题,梳子不干净或者胶没凝好你就拔梳子了。

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12楼2015-11-03 23:17:44
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-11-03 23:08:17
你已经发现问题了,同理没跑开为什么没想到你的样品DNA也太多了?克隆为目的的根本不需要这么多。如果主带明显多于其他条带,全部直接克隆,挑出你想要的大小也相当容易。
...

嗯,明天我再试下,之所以要点样多是因为我做植物内生真菌的多样性,最后要用50ul体系跑,然后切胶回收,如果点样少会不会对多样性结果有影响?

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13楼2015-11-03 23:52:51
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liweiwaxmc

铜虫 (小有名气)

凝胶分离就像筛子一样!如果筛子分不开东西!只要你的样品没有太大问题!一般都会调整筛子孔径大小!可以调整胶浓度看看!

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14楼2015-11-03 23:59:07
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by wcq吴超群 at 2015-11-03 23:52:51
嗯,明天我再试下,之所以要点样多是因为我做植物内生真菌的多样性,最后要用50ul体系跑,然后切胶回收,如果点样少会不会对多样性结果有影响?
...

多样性和最终亮度并无直接关系,很亮可以只有一种分子,看不见的一条DNA里面可能每条DNA都不相同。没逻辑。相反,是通过PCR扩增得到的库,保留多样性的第一原则就是尽量少循环,以减少扩增偏差和同质化!

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15楼2015-11-04 00:01:24
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
15楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-11-04 00:01:24
多样性和最终亮度并无直接关系,很亮可以只有一种分子,看不见的一条DNA里面可能每条DNA都不相同。没逻辑。相反,是通过PCR扩增得到的库,保留多样性的第一原则就是尽量少循环,以减少扩增偏差和同质化!
...

谢谢

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16楼2015-11-04 09:01:33
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by liweiwaxmc at 2015-11-03 23:59:07
凝胶分离就像筛子一样!如果筛子分不开东西!只要你的样品没有太大问题!一般都会调整筛子孔径大小!可以调整胶浓度看看!

谢谢

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17楼2015-11-04 09:01:54
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潘潘0227

铜虫 (小有名气)

电压变小,延长时间,胶浓度提高试试。
18楼2015-11-04 09:29:44
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 潘潘0227 at 2015-11-04 09:29:44
电压变小,延长时间,胶浓度提高试试。

嗯,正在pcr,马上试

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19楼2015-11-04 13:17:34
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足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
3楼: Originally posted by wcq吴超群 at 2015-11-03 20:22:39
maker是点太多了,所以没跑开,1%左右的胶,120V电压

你要分离500-750bp的片段,胶浓度1%偏低了,可以将胶浓度提高到2%看看。看你的Marker就没有跑开。
再就是用大一点的梳子做胶,这样跑出来的条带不会弯得这么严重。你的目的产物浓度挺高的,几条带的亮度差别较大,而大小差别又很小,所以是不大好跑开。只能提高胶的浓度,多跑一会儿
20楼2015-11-04 16:41:30
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