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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

[求助] 目的条带跑不开,是怎么了???

我在做植物的内生真菌,我先简单说下,我提了植物总的DNA,用真菌通用引物ITS1F-ITS4跑的pcr,目的是扩增总DNA里边的真菌序列,一般目的条带是在500-750bp之间,根据文献,这个通用引物会同时扩增出植物的序列,但是扩增出来的植物序列都会比真菌的长。
目前我遇到的问题是:我能扩增出多条带,但是条带跑不开,或者说跑的不是很开,不知道怎么办?因为我还要切胶回收,做蓝白斑筛选,这样难度就很大。我用了5ulpcr产物跑的胶,会不会是产物点样太多,还是我的pcr循环了35次,太多了吗?我只想让这些条带分的清晰点,不要太多融合,另外我每次跑的条带都不直,我做胶已经很按要求了,是不是我点样的技术问题,还是电泳液要换新的?这三张图是我在调试不同退火温度的

目的条带跑不开,是怎么了???


目的条带跑不开,是怎么了???-1


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满天星110

新虫 (小有名气)

胶的浓度有点低,你用的M太大了,没必要那么大的,条带不平整应该是你梳子的问题,梳子不干净或者胶没凝好你就拔梳子了。

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12楼2015-11-03 23:17:44
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