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目的条带跑不开，是怎么了？？？
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我在做植物的内生真菌，我先简单说下，我提了植物总的DNA，用真菌通用引物ITS1F-ITS4跑的pcr，目的是扩增总DNA里边的真菌序列，一般目的条带是在500-750bp之间，根据文献，这个通用引物会同时扩增出植物的序列，但是扩增出来的植物序列都会比真菌的长。 目前我遇到的问题是：我能扩增出多条带，但是条带跑不开，或者说跑的不是很开，不知道怎么办？因为我还要切胶回收，做蓝白斑筛选，这样难度就很大。我用了5ulpcr产物跑的胶，会不会是产物点样太多，还是我的pcr循环了35次，太多了吗？我只想让这些条带分的清晰点，不要太多融合，另外我每次跑的条带都不直，我做胶已经很按要求了，是不是我点样的技术问题，还是电泳液要换新的？这三张图是我在调试不同退火温度的    发自小木虫Android客户端 |
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送红花一朵
这是我今天重新试的两个样品，每个做了一次重复，用的25ul体系，退火温度等见下图，胶用的是1.5%（因为剩的有以前溶好的胶，我又加了点琼脂增加浓度），感觉听取完大家意见后，今天跑的比以前好很多，不知道各位觉得还有没有什么更加需要优化的地方？现在在500-750见的条带分布很宽，我觉得是不是植物内生真菌不同，所以扩增出来基因片段比较杂的原因，因为毕竟用的是通用引物，另外，以前怀疑最亮那一条是植物基因，但是今天看也就800bp左右，所以我觉得这个倒时也要单独切胶回收，测序下，不知道各位有什么高见？   发自小木虫Android客户端 |
22楼2015-11-04 19:41:55
2楼2015-11-03 20:19:50
3楼2015-11-03 20:22:39
4楼2015-11-03 20:23:39