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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

引用回帖:
20楼: Originally posted by 足下客 at 2015-11-04 16:41:30
你要分离500-750bp的片段,胶浓度1%偏低了,可以将胶浓度提高到2%看看。看你的Marker就没有跑开。
再就是用大一点的梳子做胶,这样跑出来的条带不会弯得这么严重。你的目的产物浓度挺高的,几条带的亮度差别较大, ...

嗯嗯,吸取了各位意见,今天从新做了一次,比以前好很多了,今晚上图,觉得有待改进

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21楼2015-11-04 18:02:17
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新虫 (小有名气)

送红花一朵
这是我今天重新试的两个样品,每个做了一次重复,用的25ul体系,退火温度等见下图,胶用的是1.5%(因为剩的有以前溶好的胶,我又加了点琼脂增加浓度),感觉听取完大家意见后,今天跑的比以前好很多,不知道各位觉得还有没有什么更加需要优化的地方?现在在500-750见的条带分布很宽,我觉得是不是植物内生真菌不同,所以扩增出来基因片段比较杂的原因,因为毕竟用的是通用引物,另外,以前怀疑最亮那一条是植物基因,但是今天看也就800bp左右,所以我觉得这个倒时也要单独切胶回收,测序下,不知道各位有什么高见?
目的条带跑不开,是怎么了???


目的条带跑不开,是怎么了???-1


目的条带跑不开,是怎么了???-2



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22楼2015-11-04 19:41:55
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新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-11-03 23:08:17
你已经发现问题了,同理没跑开为什么没想到你的样品DNA也太多了?克隆为目的的根本不需要这么多。如果主带明显多于其他条带,全部直接克隆,挑出你想要的大小也相当容易。
...

我的DNA原样稀释了10,我也试过稀释15倍,但是15倍竟然啥都没有跑出来,估计是我操作失误了,明天选两个样再稀释下试试

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23楼2015-11-04 19:47:43
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新虫 (小有名气)

24楼2015-11-05 08:23:22
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新虫 (小有名气)

不管了,下周就按现在的情况开始克隆了,希望后续试验一切顺利

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25楼2015-11-08 00:14:54
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