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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 目的条带跑不开，是怎么了？？？
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 足下客 at 2015-11-04 16:41:30
你要分离500-750bp的片段，胶浓度1%偏低了，可以将胶浓度提高到2%看看。看你的Marker就没有跑开。
再就是用大一点的梳子做胶，这样跑出来的条带不会弯得这么严重。你的目的产物浓度挺高的，几条带的亮度差别较大， ...

嗯嗯，吸取了各位意见，今天从新做了一次，比以前好很多了，今晚上图，觉得有待改进

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21楼2015-11-04 18:02:17
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
送红花一朵
这是我今天重新试的两个样品，每个做了一次重复，用的25ul体系，退火温度等见下图，胶用的是1.5%（因为剩的有以前溶好的胶，我又加了点琼脂增加浓度），感觉听取完大家意见后，今天跑的比以前好很多，不知道各位觉得还有没有什么更加需要优化的地方？现在在500-750见的条带分布很宽，我觉得是不是植物内生真菌不同，所以扩增出来基因片段比较杂的原因，因为毕竟用的是通用引物，另外，以前怀疑最亮那一条是植物基因，但是今天看也就800bp左右，所以我觉得这个倒时也要单独切胶回收，测序下，不知道各位有什么高见？
目的条带跑不开，是怎么了？？？


目的条带跑不开，是怎么了？？？-1


目的条带跑不开，是怎么了？？？-2



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22楼2015-11-04 19:41:55
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-11-03 23:08:17
你已经发现问题了，同理没跑开为什么没想到你的样品DNA也太多了？克隆为目的的根本不需要这么多。如果主带明显多于其他条带，全部直接克隆，挑出你想要的大小也相当容易。
...

我的DNA原样稀释了10，我也试过稀释15倍，但是15倍竟然啥都没有跑出来，估计是我操作失误了，明天选两个样再稀释下试试

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23楼2015-11-04 19:47:43
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
新问题

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24楼2015-11-05 08:23:22
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
不管了，下周就按现在的情况开始克隆了，希望后续试验一切顺利

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25楼2015-11-08 00:14:54
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