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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 目的条带跑不开，是怎么了？？？
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

[求助] 目的条带跑不开，是怎么了？？？

我在做植物的内生真菌，我先简单说下，我提了植物总的DNA，用真菌通用引物ITS1F-ITS4跑的pcr，目的是扩增总DNA里边的真菌序列，一般目的条带是在500-750bp之间，根据文献，这个通用引物会同时扩增出植物的序列，但是扩增出来的植物序列都会比真菌的长。
目前我遇到的问题是：我能扩增出多条带，但是条带跑不开，或者说跑的不是很开，不知道怎么办？因为我还要切胶回收，做蓝白斑筛选，这样难度就很大。我用了5ulpcr产物跑的胶，会不会是产物点样太多，还是我的pcr循环了35次，太多了吗？我只想让这些条带分的清晰点，不要太多融合，另外我每次跑的条带都不直，我做胶已经很按要求了，是不是我点样的技术问题，还是电泳液要换新的？这三张图是我在调试不同退火温度的

目的条带跑不开，是怎么了？？？


目的条带跑不开，是怎么了？？？-1


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1楼 2015-11-03 20:17:01
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gilinflying at 2015-11-03 20:30:07
样品点样可以少点。但是marker没跑开，胶的浓度是多少？

胶1.2%

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7楼2015-11-03 20:30:39
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gilinflying

新虫 (小有名气)
marker都没跑开。。胶什么浓度啊？跑了多久啊？

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2楼2015-11-03 20:19:50
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
maker是点太多了，所以没跑开，1%左右的胶，120V电压

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3楼2015-11-03 20:22:39
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
我想跑的开点，跑了30_40分钟，可是还是不行

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4楼2015-11-03 20:23:39
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