应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » IPTG诱导蛋白表达
51/1返回列表
查看: 5324  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)

[求助] IPTG诱导蛋白表达 已有3人参与

1.   当OD=0.6左右时，加入IPTG诱导目的基因的表达，如果设置对照为不加入IPTG，则对照组经过相同的诱导条件后，菌液发生了什么变化，是一直在繁殖吗？
2.  原核表达时，IPTG诱导时，如何设置对照？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-10-19 11:56:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syhzlsd

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Deng_Cheng at 2015-10-19 19:31:11
2中洗去培养基是必须的步骤吗？
3中25min是不是有点长啊？
5中取上清点样，是不是说明沉淀中蛋白已经溶到上清中了，这是什么原理？...

洗去培养基不是必须步骤，只是预防培养基会影响SDS-PAGE效果；
15min就可以，有时跑的条带会拖，所以就煮的稍微长一点；
因为loading buffer中有SDS，可以破坏细胞膜，使细胞中蛋白溶出来！
赞一下 回复此楼
7楼2015-10-20 12:11:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

syhzlsd

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Deng_Cheng: 金币+7, ★有帮助 2015-10-19 15:05:59
Deng_Cheng: 金币+3 2015-10-19 19:35:22
1、菌液依旧在正常生长，只是你的诱导温度可能不是它的最适生长温度，所以长得不一定很快；
2、对照就是不加IPTG就可以了，或者你可以加1-2%的葡萄糖在对照里，也可以用空载体做对照！
赞一下 回复此楼
2楼2015-10-19 13:23:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-10-19 13:23:48
1、菌液依旧在正常生长，只是你的诱导温度可能不是它的最适生长温度，所以长得不一定很快；
2、对照就是不加IPTG就可以了，或者你可以加1-2%的葡萄糖在对照里，也可以用空载体做对照！

还想请问一下，对于诱导前后总蛋白、诱导后可溶性蛋白的检测，电泳前怎么样收集与处理菌体，制作电泳的样品？
赞一下 回复此楼
3楼2015-10-19 15:08:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syhzlsd

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Deng_Cheng at 2015-10-19 15:08:50
还想请问一下，对于诱导前后总蛋白、诱导后可溶性蛋白的检测，电泳前怎么样收集与处理菌体，制作电泳的样品？...

1、取诱导后菌液500ul，离心6000rpm，5min，去上清；
2、沉淀加500ulddH2O，离心6000rpm，5min，去上清，洗去培养基；
3、沉淀加入70ul 2*loading buffer，煮样100度，25min；
4、离心6000rpm，3min；
5、去上清点样，5、6ul就可以了！
赞一下 回复此楼
4楼2015-10-19 17:40:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +6 启萌科技 2026-08-12 21/1050 2026-08-14 19:48 by 启萌科技
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +10 Tide man 2026-08-10 11/550 2026-08-14 10:30 by 沁言学术
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭