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Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)

[求助] IPTG诱导蛋白表达 已有3人参与

1.   当OD=0.6左右时，加入IPTG诱导目的基因的表达，如果设置对照为不加入IPTG，则对照组经过相同的诱导条件后，菌液发生了什么变化，是一直在繁殖吗？
2.  原核表达时，IPTG诱导时，如何设置对照？
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1楼 2015-10-19 11:56:18
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Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-10-19 17:40:39
1、取诱导后菌液500ul，离心6000rpm，5min，去上清；
2、沉淀加500ulddH2O，离心6000rpm，5min，去上清，洗去培养基；
3、沉淀加入70ul 2*loading buffer，煮样100度，25min；
4、离心6000rpm，3min；
5、去上 ...

2中洗去培养基是必须的步骤吗？
3中25min是不是有点长啊？
5中取上清点样，是不是说明沉淀中蛋白已经溶到上清中了，这是什么原理？
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5楼2015-10-19 19:31:11
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syhzlsd

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Deng_Cheng: 金币+7, ★有帮助 2015-10-19 15:05:59
Deng_Cheng: 金币+3 2015-10-19 19:35:22
1、菌液依旧在正常生长，只是你的诱导温度可能不是它的最适生长温度，所以长得不一定很快；
2、对照就是不加IPTG就可以了，或者你可以加1-2%的葡萄糖在对照里，也可以用空载体做对照！
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2楼2015-10-19 13:23:48
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Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-10-19 13:23:48
1、菌液依旧在正常生长，只是你的诱导温度可能不是它的最适生长温度，所以长得不一定很快；
2、对照就是不加IPTG就可以了，或者你可以加1-2%的葡萄糖在对照里，也可以用空载体做对照！

还想请问一下，对于诱导前后总蛋白、诱导后可溶性蛋白的检测，电泳前怎么样收集与处理菌体，制作电泳的样品？
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3楼2015-10-19 15:08:50
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syhzlsd

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Deng_Cheng at 2015-10-19 15:08:50
还想请问一下，对于诱导前后总蛋白、诱导后可溶性蛋白的检测，电泳前怎么样收集与处理菌体，制作电泳的样品？...

1、取诱导后菌液500ul，离心6000rpm，5min，去上清；
2、沉淀加500ulddH2O，离心6000rpm，5min，去上清，洗去培养基；
3、沉淀加入70ul 2*loading buffer，煮样100度，25min；
4、离心6000rpm，3min；
5、去上清点样，5、6ul就可以了！
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4楼2015-10-19 17:40:39
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